为什么我的样品组只看到凋亡细胞，没有活细胞？？？

Helen_ztt

我们用7AAD-APC方法检测凋亡，分组是这样的空细胞（作为阴性对照）、7AAD单阳、APC单阳、样品组葡萄糖饥饿。（单阳处理方式用的4%多聚甲醛作用了15min，网上看的方法，因为之前H2O2一直没有成功，所以试了这个方法）

于是得出如下图片，按照上面顺序显示
已经flowjo自动调节补偿。
我这样画十字门对不对？
为什么样品组大多数细胞都在早期凋亡区？？？按理说应该有一部分活细胞吧？活细胞应该跟凋亡细胞分开吧，为什么粘在一起呢？
是样品处理环节的问题？还是7AAD-APC试剂盒（凯基）的问题？还是后期流式分析的问题呢？
求指点！！！

niwanmao

这样画才对。

frozenflying

我觉得你的样品组的十字门，APC应该设在10^5的这个位置比较合适，你的样品组感觉并没有很多的早凋。

Helen_ztt

frozenflying 发表于 2017-10-21 12:46
我觉得你的样品组的十字门，APC应该设在10^5的这个位置比较合适，你的样品组感觉并没有很多的早凋。 ...

唔，这样的话是认为单阳APC那一团也是阴性吗？

frozenflying

Helen_ztt 发表于 2017-10-21 13:15
唔，这样的话是认为单阳APC那一团也是阴性吗？

我个人意见是阴性，这是我的AV单染的结果，我不确定，我这个十字门画的对不对@niwanmao

Helen_ztt

frozenflying 发表于 2017-10-21 14:04
我个人意见是阴性，这是我的AV单染的结果，我不确定，我这个十字门画的对不对@niwanmao  ...

嗯，我们等待下倪老师的解答吧@niwanmao

Helen_ztt

niwanmao 发表于 2017-10-21 16:12
这样画才对。

倪老师，就是说单阳APC那组是APC没有染上是吗？

niwanmao

Helen_ztt 发表于 2017-10-21 16:13
倪老师，就是说单阳APC那组是APC没有染上是吗？

前面另一个帖子就跟你说过了，多聚甲醛本来就不是作为阳性对照，而是会使整体荧光呈一个显著的增高。

Helen_ztt

niwanmao 发表于 2017-10-21 16:15
前面另一个帖子就跟你说过了，多聚甲醛本来就不是作为阳性对照，而是会使整体荧光呈一个显著的增高。 ...

我错了，倪老师，你回答我那篇帖子的时候，我们已经试多聚甲醛了……我们一定改回正规的阳性对照！
不过我还有个疑问，如果把样品组那个细胞团算在Q4区里，就是认为细胞没有APC染色吧？可是为什么空细胞的细胞团在APC轴10的2次到4次范围，样品的细胞团在APC轴10的4次到5次呢？这不能认为样品组是染上了吗？如果还是认为没染上，为什么它们会差这么多呢？

Helen_ztt

niwanmao 发表于 2017-10-21 16:15
前面另一个帖子就跟你说过了，多聚甲醛本来就不是作为阳性对照，而是会使整体荧光呈一个显著的增高。 ...

倪老师，我们样品组没有用多聚甲醛处理的