如何选择密度梯度离心分离液

niwanmao

不同密度梯度离心分离液的优缺尽管流式中文网出品的FlowGuard细胞保存液（https://detail.youzan.com/show/g ... 22839&spm=f46216002）可以使全血、骨髓样本保存14天～28天，直接以保存液：样本＝1：8加入标本，方便易用，使得批量检测成为可能，但是还是会有FLOWER希望能够使样本保存更长时间，几个月甚至数年，这时，就需要提取出其中的单个核细胞，冻存到液氮了。

不同种类的细胞具有不同的密度，提取单个核细胞就是利用这个特点，采用密度梯度离心进行分离。

下面就不同的密度梯度离心液进行一个概括和优缺点总结，供选择参考：

1、Ficoll-Paque，Lymphoprep

Ficoll-Paque含有Ficoll，一种高度支链化的多糖和异构体。 LymphoPrep将后者用泛影酸钠替代。
两者具有低粘度、无毒的特点，可以制备成不同的密度用于分离。 Ficoll-Paque梯度分离液通常用于分离全血中外周血单个核细胞、粒细胞、红细胞，也可有效地除去死细胞也是可行的（不过需要注意的是，此分离过程对活细胞也有影响）。当分离血液时，上层部分含有淋巴细胞和其他单个核细胞。将非离子X射线造影剂碘海醇加入到梯度介质中也可以去除单核细胞。


Nycoprep和OptiPrep是不含Ficoll的梯度溶液，前者是具有三个脂类分子、高亲水性侧链的苯甲酸三碘化衍生物，后者结构上是碘克沙醇。因此，它们不是基于多糖的原理。从粒细胞/红细胞混合物中，可以通过葡聚糖沉淀进一步分离中性粒细胞，并通过低渗溶解红细胞。

优点：易于使用，除了离心机，其余设备几乎不需要。
缺点：
物种之间类似细胞的密度可以不同（例如小鼠、马和人的淋巴细胞）。
如果分离液加得太多或血液凝固，红细胞和粒细胞可以在上层被捕获。
离心必须在室温下进行。
在梯度离心液上加血液的步骤是耗时的，而且必须小心。
从梯度离心液表面收集细胞时，可能出现细胞损失和再次污染。
细胞激活可能是一个问题，例如分离中性粒细胞时。



Percoll

第二种密度分离介质是Percoll，由用聚乙烯吡咯烷酮涂覆的胶体纳米二氧化硅颗粒制成。 Percoll是无毒的并且具有低粘度，所以细胞可以在低离心力下离心。 可以通过将不同百分比的Percoll的溶液在管中分层来形成密度在1.0和1.3g / mL之间的等渗梯度。 不同密度的细胞在不同的界面处收集并且可以被除去。 由Sephadex制成的彩色密度标记微球有助于显示梯度中的密度边界。


优点：通用，因为在一个管中分离不同层的几种细胞类型。
缺点：与前述的Ficoll-Paque一样。细胞激活也是一个问题，必须考虑在内。


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参考文献：
Eur. J. Immunol. 2017. 47: 1584–1797 Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies