流式菜鸟关于胞内蛋白染色的一些问题。

去归来兮 · 发表于 2017-11-3 11:21:16

染细胞内的Nestin蛋白，用R&D的nestin抗体和ISOtype，克隆号啥的都对过，无误。

破膜固定用BD的KIT，按操作说明操作的。

问题：ISOTYPE我调得比较靠左，怕阳性跑出去了。我发现染了目的蛋白之后，整体比ISOtype都右移了，这个是为什么呢？因为ISOTYPE选得不好？抗体特异性不强，有非特异染色？还是我破膜固定时的操作有问题？

研究了有段时间也搞不清楚应该怎么分析最好，附上流式数据，能不能帮忙看看。

liuruiluna · 发表于 2017-11-3 11:31:54

大概和此细胞系也有关吧，用的细胞系在参考文献中的染色情况是有很清楚的两个峰吗？

niwanmao · 发表于 2017-11-4 09:36:52

抗体和isotype是什么Ig类型？有没有事先进行Fc Blocking

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