MitoSOX-线粒体ROS

胡颖超abc

                               
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组图一：BMDM(骨髓经体外诱导分化的巨噬细胞)，在用LPS刺激后的流式荧光峰图，骨髓巨噬细胞FSC-SSC分左右两群细胞，用三种圈门方式得到的MitoSOX峰图，问题是no treat组和LPS组峰图为什么那么靠近？（处理方法：骨髓巨噬细胞体外诱导分化7天，种板，notreat组和LPS组，MitoSOX染色，刮取细胞，上机检测），收细胞前镜下观察刺激后细胞状态和no treat组有明显改变，但是流式检测却和no treat差不多，不知道什么原因

                               
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组图二，处理方式和分析方式同图一，但是圈不同的门得到的MitoSOX峰图不太一致，不知道该圈哪门细胞？no treat组和LPS组峰图为什么依然很靠近，为什么呢？

niwanmao

在FSC/SSC散点图上，左侧的FSC小的这类属于凋亡或坏死细胞，而你要检测的是超氧化物水平，属于早期发生的事件，所以我个人觉得应该是圈FSC大的这类未发生凋亡的正常细胞。

至于为什么这三组会没差异，我觉得首先你得确定一下染色和检测没有问题，其次细胞形态发生改变，并不能代表胞内的超氧化物水平也肯定有差异，这个可能只能你自己逐一去验证了。至于染色和检测上有没有问题，建议可通过阳性对照来（按照说明书https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/mp36008.pdf，似乎sodium nitrite亚硝酸钠可以制备阳性对照）。

胡颖超abc

niwanmao 发表于 2017-11-13 14:32
在FSC/SSC散点图上，左侧的FSC小的这类属于凋亡或坏死细胞，而你要检测的是超氧化物水平，属于早期发生的事 ...

好的，谢谢倪老师！