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[标本处理] 同一批样本的T细胞B细胞有些分群有些不分群,染色失败?

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发表于 2017-11-20 16:07:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
倪老师,您好,我今天做flow发现一个非常奇怪的问题,同一批做的脑组织的样本,同样染CD3 FITC; CD19 BUV395; CD4 APC 和 CD8 BUV510 以及其他5种表面marker, 但是8个样本中只有其中的一个可以见到明显的T细胞和B细胞的分群,其他的7个只能分出CD3阴性和阳性两群,而在CD3 阳性的T 细胞里,这7个样本也不能在CD4和CD8的两个marker 中分群。( 附图 分别为 可以分群的脑1(T&Bcell),脑1(CD4,CD8 Tcell), 不能分群的脑2( B& Tcell),第二排是脑2(CD4&CD8) ,以及两个血样品的分群。 这8个样本都是我亲自同时处理的,使用的是同时配好的同一管抗体,设门前排除了死细胞(只用了FSC-w和SSC-w)和粘连体,补偿调节似乎也没太大问题,同时为了证实抗体是好用的,我还同时染了血和脾,都可以清晰的分群。 我之前从没有遇到过这么奇怪的现象,请问为什么同一批染色会出现这么大差异?非常感谢!

脑1

脑1

脑1

脑1

脑2

脑2

脑2

脑2

血

血


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发表于 2017-11-20 20:02:25 | 显示全部楼层
有些酶会对抗原有影响的,你用什么办法解离组织的?
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 楼主| 发表于 2017-11-21 00:09:19 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-11-20 20:02
有些酶会对抗原有影响的,你用什么办法解离组织的?

我用的是现成的Miltenyi 家专门制备脑组织单个细胞的kit,用的30%和70% percoll 密度梯度离心分离的细胞。
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发表于 2017-11-22 08:31:49 | 显示全部楼层
hdwd22 发表于 2017-11-21 00:09
我用的是现成的Miltenyi 家专门制备脑组织单个细胞的kit,用的30%和70% percoll 密度梯度离心分离的细胞 ...

有没有用过酶?我记得这个Kit应该是含酶的。如果有的话,你改成不用酶,单纯用机械法试试,尽管死细胞可能会增多,但染色可能会改善。
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 楼主| 发表于 2017-11-26 12:03:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-11-22 08:31
有没有用过酶?我记得这个Kit应该是含酶的。如果有的话,你改成不用酶,单纯用机械法试试,尽管死细胞可 ...

好的,谢谢倪老师!
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