一个成功的多色流式方案的设计，关键之处你知道在哪里？

niwanmao

提到高质量的多色流式方案设计，在众多的讲座里面，你可能听到最多的关键点是亮度和补偿。实际上现在的补偿算法，你补偿大都还是可以减掉的，关键反而是「扩散误差」（即spreading error， SE）。

SE是一个什么概念呢？
首先来看下面这幅图，在不少多色流式实验中，相信大家都会看到。这是正确调节好补偿的（即阳性信号的Median＝阴性细胞的Median）。


然而阳性区域的鱼尾形扩散，就提示扩散误差（SE）大，从而使得Alexa 700信号的测量成了问题，你看下面B图和C图，B图中CD8＋和CD8－细胞群的Alexa700信号强度足够强，脱离了鱼尾区域，那么无论CD8＋和CD8－细胞的Alexa 700信号表达率均不受影响，但如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样，很显然，CD8＋细胞的Alexa700表达率立马大幅降低，而CD8－者却不受影响。

游客，本帖隐藏的内容需要积分高于 55 才可浏览，您当前积分为 0

参考文献：
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. Eur J Immunol. 2017 Oct;47(10):1584-1797.

sunny2829

等待可以看到隐藏的部分~~~

nitina

流星充不了值，请站长解决～

niwanmao

nitina 发表于 2017-11-25 05:43
流星充不了值，请站长解决～

现在取消流星充值了，还是鼓励大家多分享各类资料，甚至自己的实验心得、实验结果，即可获得流星加分。

虎贲中郎将

先标记，积分够了再看

nitina

niwanmao 发表于 2017-11-26 17:34
现在取消流星充值了，还是鼓励大家多分享各类资料，甚至自己的实验心得、实验结果，即可获得流星加分。 ...

懂了～谢谢站长～

liuyaqun

谢谢老师

liuyaqun

谢谢老师 受益匪浅

jmc_1211

如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样，很显然，CD8＋细胞的Alexa700表达率立马大幅降低，而CD8－者却不受影响。
请教一下老师，为啥落入鱼尾扩散区的信号不能被detected到？

niwanmao

jmc_1211 发表于 2017-12-28 22:16
如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样，很显然，CD8＋细胞的Alexa700表达率立马大幅降低，而CD8－ ...

因为图中鱼尾A区都是误差信号所在区域，即使有弱阳性的信号混在里面，根本无法圈出来计算比例。