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一个成功的多色流式方案的设计,关键之处你知道在哪里?

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发表于 2017-11-20 19:51:07 | 显示全部楼层 |阅读模式

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提到高质量的多色流式方案设计,在众多的讲座里面,你可能听到最多的关键点是亮度和补偿。实际上现在的补偿算法,你补偿大都还是可以减掉的,关键反而是「扩散误差」(即spreading error, SE)。

SE是一个什么概念呢?
首先来看下面这幅图,在不少多色流式实验中,相信大家都会看到。这是正确调节好补偿的(即阳性信号的Median=阴性细胞的Median)。
屏幕快照 2017-11-20 下午7.02.18.png

然而阳性区域的鱼尾形扩散,就提示扩散误差(SE)大,从而使得Alexa 700信号的测量成了问题,你看下面B图和C图,B图中CD8+和CD8-细胞群的Alexa700信号强度足够强,脱离了鱼尾区域,那么无论CD8+和CD8-细胞的Alexa 700信号表达率均不受影响,但如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样,很显然,CD8+细胞的Alexa700表达率立马大幅降低,而CD8-者却不受影响。
屏幕快照 2017-11-20 下午7.02.26.png 屏幕快照 2017-11-20 下午7.02.33.png
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参考文献:
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. Eur J Immunol. 2017 Oct;47(10):1584-1797.

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发表于 2017-11-22 13:39:14 | 显示全部楼层
等待可以看到隐藏的部分~~~
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发表于 2017-11-25 05:43:32 | 显示全部楼层
流星充不了值,请站长解决~
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 楼主| 发表于 2017-11-26 17:34:16 | 显示全部楼层
nitina 发表于 2017-11-25 05:43
流星充不了值,请站长解决~

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发表于 2017-11-26 22:53:29 | 显示全部楼层
先标记,积分够了再看
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发表于 2017-11-27 10:24:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-11-26 17:34
现在取消流星充值了,还是鼓励大家多分享各类资料,甚至自己的实验心得、实验结果,即可获得流星加分。 ...

懂了~谢谢站长~
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发表于 2017-12-20 01:21:01 | 显示全部楼层
谢谢老师 受益匪浅
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发表于 2017-12-28 22:16:05 | 显示全部楼层
如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样,很显然,CD8+细胞的Alexa700表达率立马大幅降低,而CD8-者却不受影响。
请教一下老师,为啥落入鱼尾扩散区的信号不能被detected到?
IMG_20171228_221050.png
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 楼主| 发表于 2017-12-29 07:57:15 | 显示全部楼层
jmc_1211 发表于 2017-12-28 22:16
如果这两群细胞Alexa 700的表达强度降到C图这样,很显然,CD8+细胞的Alexa700表达率立马大幅降低,而CD8- ...

因为图中鱼尾A区都是误差信号所在区域,即使有弱阳性的信号混在里面,根本无法圈出来计算比例。
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