多色方案搭配和优化实战

niwanmao

上周末广州聚会，站友提到最多的问题就是多色搭配和CFSE增殖，其中几位研究生站友在多色方案搭配上的优化也是令人眼前一亮。
好的话题，讲得再多，也不会有人嫌烦的，所以就从油×管上，把11月上旬Bio-Rad公司放出来的多色方案搭配和优化的一个实例视频转过来，与FLOWER们分享。在视频之前，我们先来简要介绍一下视频的内容，方便大家观看视频。

视频主要讲述的是NK和NKT免疫细胞检测多色方案的搭配和优化。

1、多色方案的关键因素：仪器、可用荧光素、荧光素亮度、抗原在细胞上的表达强度、荧光素之间的补偿情况：



2、NK和NKT方案的抗体组成，此时只关注表型和分群：



3、先进行尝试性搭配方案1，荧光素组成如下：



4、用方案1的分析结果如下，可见CD16和CD56的分群均不太好：



5、对荧光素亮度进行探索，发现CD56 PE最强：



6、再用相同标记，探索不同抗原在细胞表面的表达量：



7、对方案1进行调整优化，形成如下的方案2：



8、方案2的分析结果如下，CD8的分群欠佳：


9、寻找原因，发现是由于Dump通道的A647荧光对CD8 A700荧光的干扰，两者之间的补偿即使调整到位，也是形成鱼尾状扩散（SE大）：



10、于是再次对方案进行微调，将CD8 改成PB标记，形成方案3：



11、最后的方案3检测结果如下，结果较为理想：



下面看视频吧：
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wenjuan1260

老师你好

wenjuan1260

我最近也在做流式每次实验都要设置一个阴性对照  调节各个通道电压  用于确定阴阳性界线电压设定好以后一般来说是不能再动了 那我单染的用于补偿调节的样品怎么调补偿  是把单染的样品读一下之后  再调吗  调补偿的时候不能动电压对吧  因为补偿不也是根据图来调吗  就是具体应该在哪里调不是很清楚  非常感谢你的回复  我用的流式是BD FACSverse的

damaiyawo

没用过 FACSuite软件

qingshi

倪老师为推动中国流式水平做出了相当的贡献！！
只可惜我的夸奖没啥用！