FITC/PI凋亡检测左上方细胞数目太多怎么办

落花微雨

用的机子是BD Accuri C6，做的是贴壁细胞，可能吹打的比较用力，凡是药物处理组左上方均或多或少有一定比例的细胞，请问：这种情况发文章的时候有问题吗？这样可以通过调节补偿什么的改善吗？第一次做凋亡，圈门补偿也是自己调的，也不知道对不对，求大神也帮忙看一下！

落花微雨

第四幅图是 对照组。。

niwanmao

落花微雨 发表于 2017-11-30 15:26
第四幅图是 对照组。。

我认为可以按照这个方式设门。

落花微雨

niwanmao 发表于 2017-11-30 21:45
我认为可以按照这个方式设门。

老师，您的意思是门都往上平移一下对吧，那么我对照组就离门那条水平线太远了，这样也可以吗？流式小白，多谢老师解答

miliamlau

几点：
1. 看上去你的细胞自发荧光很厉害，是否考虑将FITC-Annexin V换成APC标记的，用FL2和FL4进行检测。
2. 你的FL2-FL1和FL1-FL2补偿显然都调太高了。你是把自发荧光的那群细胞（本来是斜的）硬生生压平了。
3. 还有一个问题，你的药是否有荧光？

落花微雨

miliamlau 发表于 2017-12-4 16:52
几点：
1. 看上去你的细胞自发荧光很厉害，是否考虑将FITC-Annexin V换成APC标记的，用FL2和FL4进行检测。
...

老师您好，我的细胞和药都没有荧光，我的单阳补偿都只调了５％，我也不知道为什么PI染色的那么强，导致整个图片看上去特别靠上。流式小白，多谢老师解答。

miliamlau

这个是什么细胞？我经常碰到跟你差不多的情况。

落花微雨

miliamlau 发表于 2017-12-4 22:35
这个是什么细胞？我经常碰到跟你差不多的情况。

老师，这个细胞是A549

名字真不好

习惯于FSC-SSC的细胞群处于对角线，也就是你需要把SSC电压调高一些。同时，control（未加药物，双染）调节电压，使其位于左下角（可点击Grid，使其位于16格的最左下格），这样方便画十字门。

落花微雨

名字真不好 发表于 2017-12-21 09:25
习惯于FSC-SSC的细胞群处于对角线，也就是你需要把SSC电压调高一些。同时，control（未加药物，双染）调节 ...

老师，我用的BD的机子，没法调电压