巨噬细胞分型流式检测问题

tinaxiaojuan89

有没有老师做Raw264.7加刺激试剂检测分型的，我用的M1型抗体是CD16/32，M2型抗体是CD206，QPCR可以检测到M1和M2型的特异性因子的表达，但是流式的结果细胞不分群，是操作的问题还是抗体选择问题？

skywalker

Cd206 and ia-i.e.

chevalierx

对于体外培养的情况，尤其对于细胞系，刺激是相对均匀的，因此要考虑到M1或者M2的信号不是这个细胞表达而另一个细胞不表达的，所以分群不明显很正常，若分群明显倒要考虑刺激是否均匀或者吹打产生机械损伤的问题了。建议可以采用histogram，通过比较group之间的MFI值（信号整体的增强情况）来分析。

miliamlau

                               
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CD206本来就是连续表达pattern，看不出分群是很正常的。只能通过同型对照确定阴阳分界了。

ps：回楼上的，这跟刺激不刺激没关系，表达谱已经说明一切了

tinaxiaojuan89

各位老师，我做出来的图就是这个样子，横坐标是CD206，纵坐标是CD16/32，这样的结果正常么？应该怎么分析呢？

niwanmao

tinaxiaojuan89 发表于 2017-12-5 08:24
各位老师，我做出来的图就是这个样子，横坐标是CD206，纵坐标是CD16/32，这样的结果正常么？应该怎么分析 ...

我感觉还行啊，是否事先做了Fc Blocking？做了话，可以用空白对照设门。

tinaxiaojuan89

niwanmao 发表于 2017-12-5 09:14
我感觉还行啊，是否事先做了Fc Blocking？做了话，可以用空白对照设门。

老师，您说的空白对照是指不加抗体的细胞那组么？还是加了抗体没加药物刺激的那组细胞？

niwanmao

tinaxiaojuan89 发表于 2017-12-5 09:49
老师，您说的空白对照是指不加抗体的细胞那组么？还是加了抗体没加药物刺激的那组细胞？ ...

跟你的实验组处理方式一样，但是同样进行了Fc Blocking，只是不加抗体的细胞。

tinaxiaojuan89

niwanmao 发表于 2017-12-5 10:04
跟你的实验组处理方式一样，但是同样进行了Fc Blocking，只是不加抗体的细胞。 ...

老师，RAW264.7细胞经LPS刺激后，细胞形态发生改变，大小也变了，那我是不是应该用加了LPS刺激但没加抗体的那组细胞来设门？我目前做的几次都是用未加LPS刺激未加抗体的裸细胞来设门的，这样做是不是不对？

niwanmao

tinaxiaojuan89 发表于 2017-12-5 10:52
老师，RAW264.7细胞经LPS刺激后，细胞形态发生改变，大小也变了，那我是不是应该用加了LPS刺激但没加抗体 ...

是需要的。刚才我说的跟实验组处理方式一样，意思就是如果你的实验组加了LPS，或加了某药，那么你的空白对照也得事先加过这种处理，这样才能使细胞各种状态完全一致。

实际应用时，可以直接把实验组细胞收集后分成两部分，一部分做空白对照，一部分进行Fc Blocking并染色。就这么简单。