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对骨髓、外周血、脾脏等样本进行流式免疫分型时,裂解红细胞是必须要做的。减少或消除红细胞(RBCs)后,可以使白细胞更容易分析,而且获取也更容易,不会因为阈值的设置导致淋巴细胞被部分排除掉。
不过,RBC裂解对免疫分型也会存在一些影响,例如可能使细胞丢失、侧向散射(SSC)和前向散射(FSC)的变化、影响抗体染色效果等等。因此,选择最适合您的仪器、实验的裂解液,并在内部验证至关重要。
今天来对比一下不同的裂解方法和试剂,讨论影响结果的因素,为大家提供一些参考。
目前最常用的裂解方法有两类:大体积裂解(裂解/染色/洗涤)、管内裂解(染色/裂解/洗涤)。两种裂解方法的优缺点如下。
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此文的目的并不是评估哪种裂解液好,哪种坏,大家在平时使用时,要根据自己的实验进行客观选择,避免对自己检测指标有影响的,选择对检测指标有利的裂解液。
参考文献:
Lysing Methods and Reagents for Flow cytometric Immunophenotyping. By Melanie O’Donahue and Laura Johnson.
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