流式可以用PBST洗涤细胞吗？

Firefly

    最近在用兔多抗做流式，感觉非特异性结合非常强，不知道大家有没有人试过用PBST来洗涤细胞，效果会不会好一些呢。流式小白求帮助！

chevalierx

Firefly 发表于 2017-12-14 21:02
嗯嗯，我们做的是鱼类淋巴细胞，所以几乎没有商品化的阻断剂呢

做WB或者ELISA的话，因为是纯蛋白，所以用tween-20洗脱疏水键结合问题不大，但是如果做流式的话，我不确定这种去垢剂会不会对淋巴细胞表面抗原的表达产生影响.....如果多抗效果不好，可以尝试FCM联合RNA探针，印象里16还是17年有一篇nature protocol专门写了这种检测方法。

ghqiu09

没听过，也不懂能不能这么做。如果非特异太强，试试滴定下抗体浓度。

chevalierx

PBST常见于ELISA，WB这种实验吧，用于洗脱非特异性结合。FCM用PBST还是比较少见的，我没听说过。小鼠的话你试试先用抗体封闭下Fc，人的话用抑制剂，然后再染色。

Firefly

chevalierx 发表于 2017-12-14 17:07
PBST常见于ELISA，WB这种实验吧，用于洗脱非特异性结合。FCM用PBST还是比较少见的，我没听说过。小鼠的话你 ...

嗯嗯，我们做的是鱼类淋巴细胞，所以几乎没有商品化的阻断剂呢

Firefly

chevalierx 发表于 2017-12-14 21:21
做WB或者ELISA的话，因为是纯蛋白，所以用tween-20洗脱疏水键结合问题不大，但是如果做流式的话，我不确 ...

嗯嗯我回去查查，万分感谢!

niwanmao

Firefly 发表于 2017-12-14 21:02
嗯嗯，我们做的是鱼类淋巴细胞，所以几乎没有商品化的阻断剂呢

你是指含Tween的PBS是吧？这个不行的。非特异性高的话，可能还是抗体问题，如果鱼类的阻断剂找不到，只能退而求其次，用兔源的同型对照了。