细胞周期，癌细胞未经处理组和处理组G2M期都不明显

容若

       新手上路，求助老师们，最近在做癌细胞的细胞周期，奈何一直做不出细胞（空白组）的G2M期，给药处理24h，染色前没计数，PI染色30min重悬细胞，直接用试剂盒里的稀释液稀释染色后的细胞，检测，收的细胞是2万。不知道哪里出了问题，用的是碧云天的周期试剂盒。检测过程中看见有G2M峰，收完细胞后，结果是一个明显的单峰。附图顺序空白组，低浓度药物处理组，高浓度药物处理组：

niwanmao

有些机器的信号看起来就是不好看。
首先，这个FSC/SSC散点图的细胞位置是否正确，其次Area的电压似乎太小，这仪器是否可以用Area来排除粘连体？我有点奇怪。

容若

niwanmao 发表于 2017-12-26 08:44
有些机器的信号看起来就是不好看。
首先，这个FSC/SSC散点图的细胞位置是否正确，其次Area的电压似乎太小， ...

用的流式细胞仪是：guava easyCyte。判断散点是不是细胞方法：分别用纯溶剂和含细胞的溶剂上的样，来确定细胞分群，在通过反向射门看不确定的散点红色荧光的强弱（弱则判断为非细胞物质，圈门就去掉该部分）来区分细胞群。老师，您看我这样判断对么，第一次帖子上面的图是用modfit软件做的。我附一张正在检测拍的图，老师您看圈门和电压条件设的对不对，上样流速是中速，谢谢您。

niwanmao

容若 发表于 2017-12-28 11:08
用的流式细胞仪是：guava easyCyte。判断散点是不是细胞方法：分别用纯溶剂和含细胞的溶剂上的样，来确定 ...

但是你得小心，FSC和SSC用了Log参数，很可能圈了细胞碎片。你既然是癌细胞，应该是挺大的，为什么用Log坐标呢？

容若

niwanmao 发表于 2017-12-28 14:11
但是你得小心，FSC和SSC用了Log参数，很可能圈了细胞碎片。你既然是癌细胞，应该是挺大的，为什么用Log坐 ...

那我最近再做一次，用FSC-lin和SSC-lin圈细胞，看是不是我选错细胞群了。这个癌细胞是LLC细胞，肺腺癌，细胞不大。

niwanmao

容若 发表于 2017-12-28 14:48
那我最近再做一次，用FSC-lin和SSC-lin圈细胞，看是不是我选错细胞群了。这个癌细胞是LLC细胞，肺腺癌， ...

癌细胞再不济也会比淋巴细胞要大的，所以用Log，大多是用在非常小的红细胞、血小板上面的。

容若

倪老师，重新做了一次pc12的细胞周期，发现还是没有G2M期，您看是条件设的不合适么？

niwanmao

容若 发表于 2018-1-5 14:19
倪老师，重新做了一次pc12的细胞周期，发现还是没有G2M期，您看是条件设的不合适么？ ...

这两张图一点都看不清楚

容若

niwanmao 发表于 2018-1-5 19:15
这两张图一点都看不清楚

老师，太抱歉了。您看这两张图能看清么。

初学者一号

最后一张图建议用lin，不要用log