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发表于 2017-12-27 14:44:24
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Live/Dead染料我们没有测试,仔细看了下说明书,从其原理看,可能不适合FlowGuard保存过的样本,因为我们测试过Annexin V,用FlowGuard保存后,会出现阳性,Live/Dead染料标记的是细胞膜内外侧的胺,所以原理上有点类似。
因为FlowGuard内含的成份除了保护以外,还有轻微固定作用,所以对于不能在FlowGuard保存后用这些染料。
我目前考虑的是两个解决方案:
1、你可以收集到后,先用Live/Dead标记30分钟,然后洗涤后,以PBS重悬,加入FlowGuard保存液,最后保存在4度,只要避光措施到位,根据我平时染其它抗体的经验,3天~1周问题不大,更长时间,还是需要测试过才行。
2、放弃Live/Dead,改用FSC/SSC散点图排除死细胞和凋亡细胞,用CD45/FSC排除红细胞和碎片 ,FSC-H/FSC-W排除粘连体,这样子,其实起到跟用Live/Dead相同的效果。不用Live/Dead的文章还是相当多的。
最后要提一下的是,如果你在组织解离时,使用了酶消化,那么无论怎么保存,Live/Dead都是可能出现假阳性的,因为其原理跟Annexin V染料有点类似。 |
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