肿瘤浸润的treg检测

谱一首幸福

请问有没有人用过bioleglend破核膜的试剂True-Nuclear™ Transcription Factor Buffer Set（货号：

424401

），染过中林浸润淋巴细胞的foxp3呢？为什么我完全按照说明书来的，不管是PE-ki67还是alexa647-FOXP3都染不上呢？大家有没有遇到这种情况啊，是什么原因啊（用的其他抗体分别是FITC-CD3，PE-CD4，APC-CD8，分别想做的CD3CD8ki67和CD3CD4Foxp3），但是ki67和FOXP3一直染不上

chevalierx

你是混在一块测的么？alexa647和APC的发射光重叠的诶

niwanmao

抗体是哪家的？
你可以先拿外周血淋巴细胞测测看，如果外周血也一点染不上，抗体和破膜剂就得一一去排除了。目前你提供的信息有限，无法提出更多建议。

niwanmao

chevalierx 发表于 2017-12-27 14:06
你是混在一块测的么？alexa647和APC的发射光重叠的诶

楼主是分开做的，上面写明了。

谱一首幸福

niwanmao 发表于 2017-12-27 15:05
抗体是哪家的？
你可以先拿外周血淋巴细胞测测看，如果外周血也一点染不上，抗体和破膜剂就得一一去排除了 ...

所有的产品用的都是bioleglend的

谱一首幸福

chevalierx 发表于 2017-12-27 14:06
你是混在一块测的么？alexa647和APC的发射光重叠的诶

不是啊，染foxp3的时候不用加APC-CD8啊

chevalierx

biolegend的我没用过，用过eBioscience的试剂盒是可以染上的，CD4 FITC, CD25 PE, Foxp3 APC。你可以把图贴上来让大家看下，或者建议看下histogram，看看有没有阳性峰。肿瘤里面细胞成分复杂，Treg的比例本身就不高。

谱一首幸福

niwanmao 发表于 2017-12-27 15:06
楼主是分开做的，上面写明了。

抗体和破膜剂都是bioleglend新买得。因为做TIL时，肿瘤细胞占绝大部分，倪老师，根据您的经验看，肿瘤细胞会不会影响T细胞的破核呢？

谱一首幸福

chevalierx 发表于 2017-12-27 15:52
biolegend的我没用过，用过eBioscience的试剂盒是可以染上的，CD4 FITC, CD25 PE, Foxp3 APC。你可以把图贴 ...

你做的也是消肿瘤组织细胞吗？图我贴上来了，但是贴的是CD3CD8Ki67的图，都是核内抗原染色，两者都染不上，我怀疑是方法的问题

chevalierx

谱一首幸福 发表于 2017-12-27 16:20
你做的也是消肿瘤组织细胞吗？图我贴上来了，但是贴的是CD3CD8Ki67的图，都是核内抗原染色，两者都染不上 ...

单纯看你给的图，我不能确定你有没有染上。（1）通常做核内染色，为了确定阳性群位置会做同型对照，你的图没有同型对照；（2）你的PE荧光强度并不低，在没有同型对照的情况下，不确定这种荧光强度是由于电压没调好导致的还是其他因素。