PI单染细胞周期没有S期和G2期

niwanmao

标题：PI单染细胞周期没有S期和G2期

老师您好

这个是我最近一次做流式的结果：

依然是没有G2期和S期的峰。

关于细胞的收集和分析已经按照倪老师的讲解做出了改正，但结果仍然这样。

给我做流式的操作员说可能是细胞没有被PI染充分，不知道是不是这个原因？

我染PI的步骤是按照本网站上面提供的方法处理的。

请老师帮忙分析一下问题可能出在哪里。

谢谢诶

那倪老师觉得这个跟PI的染色有没有关系呢，因为之前操作员说过这个问题后，我又新配了PI，并且加入了破膜剂Triton X-100，但所有的结果还是这样，这个结果跟预想的结果完全不一样，并且各个药物浓度之间都一样没有明显的G2期和S期，感觉像是整个系统的问题。

回答者：niwanmao[2009年8月12日 0:54]

我从图片上看无论如何这G2也不可能是0啊。右下角的FL2-A/FL2-W点图上，明明G2/M期比例不少的，怎么到了上面这个直方图，就只剩下G0/1呢？肯定是分析上的问题了。

如有可能，你可以把源数据发给我看看。我分析后把图传到这里给你看。

回答者：niwanmao[2009年8月12日 0:54

我选了你发给我的这批数据中的一个做了如下的图：

首先，G2/M期比例的确比较低，但肯定不是0。

其次，你的标本中粘连体比较多，是不是处理时没充分振荡均匀？不过对结果影响不大。

回答者：niwanmao[2009年8月12日 0:54]

回复ysybeyond88（那倪老师觉得这个跟PI的染色有没有关系呢，因为之前操作员说过这个问题后，我又新配了PI，并且加入了破膜剂Triton X-100，但所有的结果还是这样，这个结果跟预想的结果完全不一样，并且各个药物浓度之间都一样没有明显的G2期和S期，感觉像是整个系统的问题。）：

你原来没有加入Triton X-100吗？那是不行的。标准的PI染液配方请参见Current protocol in cytometry一书的相关章节  http://www.flowcyto.cn/bbs/reader.php?mod=flowreader&file=JzNd5E7h14sEVhvugXwIxQsQomdo3urGo53mSorER8 （第12页最下方）

注：由于2011年搬迁服务器时部分图片丢失，故本帖的图片暂时缺失，抱歉。