关于CFSE实验，我的细胞有没有增殖？

dailian · 发表于 2018-1-6 13:54:49

请老师帮我分析一下，我这个Teff细胞有没有增殖？为什么做出来的图跟文献中的不一样啊。
图1是阴性对照（不染CFSE）;图2是阳性对照（培养5d后染CFSE）；图3是实验组，Teff；图4也是实验组，Teff+Treg；图5是文献中的图。
teff有5万，并且没孔都加了PHA和IL-2。

Jeff · 发表于 2018-1-6 17:51:06

首先，根据图一和图二来对比，CFSE染上了，我有个问题:为什么你是培养五天后再染CFSE呢，不应该是先染CFSE，再培养的么？说句实话，不是很能理解你这个实验的设计

鑫鑫点灯灯 · 发表于 2018-1-7 09:44:47

CFSE浓度多少，标记多长时间？你用的PHA是多大剂量，是多大孔培养？il-2多大浓度，每次换液怎样补充

whyxa · 发表于 2018-1-7 14:24:37

Jeff 发表于 2018-1-6 01:51
首先，根据图一和图二来对比，CFSE染上了，我有个问题:为什么你是培养五天后再染CFSE呢，不应该是先染CFSE ...

他的图2，之所以培养5day后在染CFSE，是因为他要做CFSE阳性对照

whyxa · 发表于 2018-1-7 14:29:11

我不是很清楚你的标本是人的标本还是小鼠的标本，我也不清楚你所列举的文献中的标本是人还是鼠。依我的经验，小鼠的淋巴细胞CFSE增殖有着很清楚的增殖峰，但是人的标本就不明显。从你的数据看，你做的没错，有增殖。最好你显示用点图，或者密度图，要比这个直方图好一些。

dailian · 发表于 2018-1-7 18:52:35

本帖最后由 dailian 于 2018-1-7 19:01 编辑

whyxa 发表于 2018-1-7 14:29
我不是很清楚你的标本是人的标本还是小鼠的标本，我也不清楚你所列举的文献中的标本是人还是鼠。依我的经验 ...

谢谢老师，都是人的外周血标本啊。补充了散点图

dailian · 发表于 2018-1-7 20:30:29

鑫鑫点灯灯发表于 2018-1-7 09:44
CFSE浓度多少，标记多长时间？你用的PHA是多大剂量，是多大孔培养？il-2多大浓度，每次换液怎样补充 ...

淋巴细胞是悬浮的，时间也不久，就没有换液。PHA是从1ug/ml到25ug/ml,IL-2从20U/mL到300U/mL都试过了，最终用的PHA是20ug/ml,IL-2:250U/mL

tiger · 发表于 2018-1-8 16:15:38

从CD4 VS CFSE 点图看出，增殖很明显，一定要用Modfit软件分析

鑫鑫点灯灯 · 发表于 2018-1-9 00:22:15

dailian 发表于 2018-1-7 20:30
淋巴细胞是悬浮的，时间也不久，就没有换液。PHA是从1ug/ml到25ug/ml,IL-2从20U/mL到300U/mL都试过了，最 ...

感觉PHA浓度偏大，五天时间至少应该换液一次吧。你种了多少细胞，种在多大孔里？

dailian · 发表于 2018-1-11 22:55:33

鑫鑫点灯灯发表于 2018-1-9 00:22
感觉PHA浓度偏大，五天时间至少应该换液一次吧。你种了多少细胞，种在多大孔里？ ...

96孔板啊，至少有4万/孔

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[归档] 关于CFSE实验，我的细胞有没有增殖？