抗体滴定，细胞分群不明显

718工程

公司新到一批抗体，是BioLegend的抗体。先做了一支的滴定看效果，抗体是CD45RA-APC，细胞是冻存复苏的PBMC。结果细胞分群相当不明显，拖尾严重，请教应该怎么办？

CD45RA-5uL

补一张散点图，排除粘连体以后没有啥区别，另外细胞死活染色没有做。所以不知道是CD45RA表达的连续性还是死细胞太多造成的非特异染色。
                                                                                             

niwanmao

718工程 发表于 2018-1-30 10:37
那这个距离到底要怎么看呢？有什么数据量化吗？

在密度图上，依次圈中阳性核心和阴性核心，然后看统计表中的Geomean

liuruiluna

看看FSC、SSC细胞和设门情况，加上去黏连体和死活染料， 这样才好看分群的情况

niwanmao

45RA是偏连续性的，中间存在一个稀疏区域，你这样的分布是对的。可以用密度图看看两堆密度最高的区域距离大小

718工程

niwanmao 发表于 2018-1-26 18:27
45RA是偏连续性的，中间存在一个稀疏区域，你这样的分布是对的。可以用密度图看看两堆密度最高的区域距离大 ...

倪老师，您好！怎么标记密度图的两个最高峰区域距离？这个值代表什么？
我这样理解不知道对不对：密度图两个最高峰之间的距离越远代表分群效果越好，距离最远的那个就是抗体最佳使用浓度。

niwanmao

718工程 发表于 2018-1-29 08:53
倪老师，您好！怎么标记密度图的两个最高峰区域距离？这个值代表什么？
我这样理解不知道对不对：密度图两 ...

是的。

718工程

niwanmao 发表于 2018-1-30 09:28
是的。

那这个距离到底要怎么看呢？有什么数据量化吗？

718工程

niwanmao 发表于 2018-1-30 10:48
在密度图上，依次圈中阳性核心和阴性核心，然后看统计表中的Geomean

我用的分析软件是Beckman的CytExpert，统计参数里没有Geomean，只有Mean、Median、SD。

niwanmao

718工程 发表于 2018-1-30 11:35
我用的分析软件是Beckman的CytExpert，统计参数里没有Geomean，只有Mean、Median、SD。 ...

那看看Mean

718工程

感谢倪老师。