细胞凋亡分群不明显

白桦树

各位老师，图片是我分析的流式结果，是用PI和Annexin V-fitc双标记的，按照都不染的对照组圈的细胞，按照双染的对照组画的十字门，结果如图，是不是感觉有问题，总觉得D和E的细胞在十字架之间并没有分群。谢谢各位老师解答我的问题！

qzuser3

做好补偿先， D和E是否存在试剂相对于细胞数过量或染色时间过长？

白桦树

qzuser3 发表于 2018-2-24 08:40
做好补偿先， D和E是否存在试剂相对于细胞数过量或染色时间过长？

谢谢您的回答，这个已经做了荧光补偿了，B、C、D和E四个组为不同材料的暴露组，暴露浓度相同为50ppm，一起做的，所以染色时间也是几乎一样的。

niwanmao

你这个问题很简单，就是把门的位置如下方这么设置即可。切记，Annexin V/PI是分群很明显的实验，不能按照不染色的空白对照设门，因为你的空白对照有很多因素与染色组不同的。所以，直接按照分群进行划门。

白桦树

niwanmao 发表于 2018-2-24 13:23
你这个问题很简单，就是把门的位置如下方这么设置即可。切记，Annexin V/PI是分群很明显的实验，不能按照不 ...

谢谢倪老师的回答，但是如果不按照十字门来设置，按照您的方法来设置，我如何算各门里的比例呢？

niwanmao

白桦树 发表于 2018-2-24 14:30
谢谢倪老师的回答，但是如果不按照十字门来设置，按照您的方法来设置，我如何算各门里的比例呢？ ...

你理解错了，不是不让你用十字门设门，我的意思是让你不要按照空白对照来设门，而是应该直接按照分群来设置十字门位置

tiger

白桦树 发表于 2018-2-24 13:03
谢谢您的回答，这个已经做了荧光补偿了，B、C、D和E四个组为不同材料的暴露组，暴露浓度相同为50ppm，一 ...

从图上看，好像没有明显的凋亡。说一下你样品的制备过程，有可能是这方面出了问题。

白桦树

niwanmao 发表于 2018-2-26 08:50
你理解错了，不是不让你用十字门设门，我的意思是让你不要按照空白对照来设门，而是应该直接按照分群来设 ...

谢谢倪老师的回答，那按照细胞分群来画十字门，那每张图细胞的形状不同，那画十字门的位置就不相同了，是这样的吗？

白桦树

tiger 发表于 2018-2-26 09:52
从图上看，好像没有明显的凋亡。说一下你样品的制备过程，有可能是这方面出了问题。 ...

谢谢您的回复。过程为：A为对照组，B、C、D和E为不同纳米材料的暴露组，暴露48小时后，胰酶消化细胞，收集细胞，离心，转移到1.5mL小离心管中，然后加入fitc-pi，黑暗中孵育染色20 min，上流式。您看有问题吗？

tiger

白桦树 发表于 2018-2-26 16:12
谢谢您的回复。过程为：A为对照组，B、C、D和E为不同纳米材料的暴露组，暴露48小时后，胰酶消化细胞，收 ...

培养基弃了吗？