手把手教你分析人和小鼠的中性粒、嗜酸粒、嗜碱粒

niwanmao

可能很多从事免疫学研究的FLOWER研究重点不会在粒细胞家族上面，但作为免疫系统的一部分，粒细胞在主动防御上还是有着重要的作用，而且，实际上，在网站里面，还是时不时可以看到相关提问，但是大家对于用什么标记、如何分析会比较合理，仍然存在疑问。所以，这里引用《Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies.》一文中的图形，给做人和小鼠的中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞的朋友们参考。

中性粒、嗜酸粒、嗜碱粒常用的标记及其表型



人类中性粒、嗜酸粒、嗜碱粒细胞的分析设门
排除碎片、粘连体等设门在此不详述了，在排除掉这些干扰之后，用CD45/CD11b，选出双阳性的髓系细胞（下图左上小图），接着用CD15/CD16散点图显示这些细胞，可见以下群体：
（1）CD15＋CD16＋的细胞，就是中性粒细胞（蓝色）。
（2）CD15＋CD16－的细胞中，大部分是Siglec-8＋CCR3＋，就是嗜酸粒细胞（绿色）。
（3）CD15－CD16－细胞中，FcεRIα＋CCR3＋者，就是嗜碱粒细胞（红色）。




小鼠中性粒、嗜酸粒、嗜碱粒细胞的分析设门
排除碎片、粘连体如前，选择CD45＋细胞，接着用Ly6C/CD11b散点图分析，可见以下群体：
（1）CD11b+/Ly6int群体，进一步分析其Ly6G表达，Ly6G＋部分就是中性粒（蓝色）。
（2）CD11b+/LyCneg-low部分，进一步用Siglec-F和CD200R3分析，其中Siglec-F＋CD200R3－CCR3＋部分，就是嗜酸粒细胞（绿色），Siglec-F－CD200R3＋CD49b＋部分，就是嗜碱粒细胞（红色）。





参考文献：
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. Eur J Immunol. 2017 Oct;47(10):1584-1797.

tuohuangzhe

求加分，我发现个小错误，小鼠的嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞给流式图配的文字存在笔误，嗜酸性粒细胞应该是Siglec-F＋CD200R3－CCR3＋部分（绿色）；嗜碱性粒细胞应该是Siglec-F－CD200R3＋CD49b＋部分（红色）。

niwanmao

tuohuangzhe 发表于 2018-3-4 13:54
求加分，我发现个小错误，小鼠的嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞给流式图配的文字存在笔误，嗜酸性粒细胞应该是 ...

是的，微信上改过了，这边忘改了。鼓励纠错行为，加分。

雅世倩仔

niwanmao 发表于 2018-3-4 17:09
是的，微信上改过了，这边忘改了。鼓励纠错行为，加分。

请教老师，这个是全血的中性粒细胞吗？

niwanmao

雅世倩仔 发表于 2019-10-14 18:30
请教老师，这个是全血的中性粒细胞吗？

是的

萤火鱼

倪老师您好，如果想要测用裂红法分出来的中性粒细胞的纯度也是用这个圈门方法吗？有没有更简单一点的？而且在中性粒细胞容易凋亡，对测细胞纯度有影响吗？请老师指教。

niwanmao

萤火鱼 发表于 2020-1-12 20:07
倪老师您好，如果想要测用裂红法分出来的中性粒细胞的纯度也是用这个圈门方法吗？有没有更简单一点的？请老 ...

你要做人的标本还是小鼠的？

萤火鱼

niwanmao 发表于 2020-1-12 20:10
你要做人的标本还是小鼠的？

做的是人的外周血标本，谢谢老师！

niwanmao

萤火鱼 发表于 2020-1-12 20:11
做的是人的外周血标本，谢谢老师！

如果你只是想粗略了解，可以用FSC/SSC，圈出FSC和SSC都最大，并且比例最高的，就是中性粒细胞（当然，中间会混杂一些颗粒小的嗜酸）。如果想做准一点，还是需要按照上面的来，但是可以只用CD45/CD11b/CD16这三个。

萤火鱼

niwanmao 发表于 2020-1-12 20:13
如果你只是想粗略了解，可以用FSC/SSC，圈出FSC和SSC都最大，并且比例最高的，就是中性粒细胞（当然，中 ...

好的，谢谢老师，还是想做准确一点的，中性粒细胞在处理的过程中容易凋亡，这对纯度有影响吗？应该怎么分析呢？