试剂的问题还是操作过程的问题

luyexianzong

图1 和2， 3和4， 5和6  都是同一批试剂，其中1，3，5，是2个月前的检测，2，4，6是二个月后的检测。加的检测抗体的量是一样的。这是不是因为偶联的荧光抗体有降解，还是补偿不够？检测模板可能中间被人调过。请大家多提宝贵意见，越多越好。多谢多谢！

luyexianzong

请大家多提意见。谢谢！是不是因为CD3和CD79的透膜处理也有问题？

niwanmao

luyexianzong 发表于 2018-3-25 01:04
请大家多提意见。谢谢！是不是因为CD3和CD79的透膜处理也有问题？

应该是CD3的问题吧，CD3不破膜也能染上啊

luyexianzong

niwanmao 发表于 2018-3-25 15:08
应该是CD3的问题吧，CD3不破膜也能染上啊

在第2次检测的时候，CD3我既做了表面染色，也做了破膜染色，就是说CD3染了2次。
但是也有文章说这个CD3抗体批次间稳定性差。
我的第一次和第二次的CD3是同一批次抗体，不过是在4度一直放在的。
多谢倪老师。
有人也怀疑CD79和MHCII的这两个抗体因为是偶联的，是不是还有些解离了？

niwanmao

luyexianzong 发表于 2018-3-25 22:09
在第2次检测的时候，CD3我既做了表面染色，也做了破膜染色，就是说CD3染了2次。
但是也有文章说这个CD3抗 ...

CD79和MHCII如果解离了，应该是信号测不到才对，可是图上的信号分群是正常的，所以我觉得这两个抗体应该是好的。
反倒是CD3出问题了，具体是什么原因造成的，说不好，但肯定是染不上了。

luyexianzong

niwanmao 发表于 2018-3-26 09:25
CD79和MHCII如果解离了，应该是信号测不到才对，可是图上的信号分群是正常的，所以我觉得这两个抗体应该 ...

多谢倪老师！ 您这提醒的太对了。看来文章上说的这个CD3的稳定性欠佳。我的多考虑，另外我自己的操作步骤要更加细化了。
请您帮忙指点对破膜的细节上要注意的点。
多谢多谢！