冻存之后的PBMC出来这样的图片是有问题吗？

mia

各位老师好！我是用冻存复苏的PBMC来做实验的，想检测PBMC里面的淋巴细胞，我这样设门正确吗？为什么我的PBMC没有明显的分群？正确的分群应该是分成哪几群？



先谢过各位老师的解惑！

niwanmao

提取的纯度高的话，应该是只剩下淋巴细胞和单核细胞。
由于复苏之后，细胞形态可能会变化较明显，可以考虑加淋巴细胞特异性的标记，例如T细胞用CD3、B细胞用CD19、NK细胞用CD56设门圈，这样会更准确。

ghqiu09

PBMC还分群吗？这应该就是你要的lym细胞群啊，如果可以的话，加一个CD45就更好

mia

ghqiu09 发表于 2018-4-8 10:35
PBMC还分群吗？这应该就是你要的lym细胞群啊，如果可以的话，加一个CD45就更好 ...

谢谢你的回复。
因为有一个reviewer提出质疑，说PBMC应该是分成明确的三群（粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），但我们几个人做出来的都是图片这样的，所以感到疑惑。

mia

niwanmao 发表于 2018-4-8 14:18
提取的纯度高的话，应该是只剩下淋巴细胞和单核细胞。
由于复苏之后，细胞形态可能会变化较明显，可以考虑 ...

谢谢你的回复。
因为有一个reviewer提出质疑，说PBMC应该是分成明确的三群（粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），但我们几个人做出来的都是图片这样的，所以感到疑惑。
另外，因为我下一步是选择T细胞，所以是用了CD3、CD4来标记了。所以就担心会不会一开始就设门不正确，后面虽然有CD3、CD4设门也会受到影响。

niwanmao

mia 发表于 2018-4-8 16:39
谢谢你的回复。
因为有一个reviewer提出质疑，说PBMC应该是分成明确的三群（粒细胞、淋巴细胞和单核细胞 ...

有CD3表达，就可以证明这群是淋巴细胞。
这个Reviewer提的问题有关好玩的，如果提取的好，粒细胞是可以几乎没有的。至于单核细胞，不排除复苏后，细胞形态发生改变，并入淋巴细胞群体内了，但此时，可以通过CD3、CD14等标记区分开。

mia

niwanmao 发表于 2018-4-8 19:20
有CD3表达，就可以证明这群是淋巴细胞。
这个Reviewer提的问题有关好玩的，如果提取的好，粒细胞是可以几 ...

谢谢你~

ghqiu09

mia 发表于 2018-4-8 16:39
谢谢你的回复。
因为有一个reviewer提出质疑，说PBMC应该是分成明确的三群（粒细胞、淋巴细胞和单核细胞 ...

那是全血裂解才是分三群，淋巴细胞单核细胞和粒细胞。你这个是用淋巴细胞分离液去掉了粒细胞的，单核比例比较小，一般都看不到明显的细胞群。

xuwenpku

pbmc是外周血单个核细胞，粒细胞是多叶核，是不包括在其中的。我们一直是这么理解的。

liuruiluna

可以和reviewer解释一下冻了之后，粒细胞去粒化了，密度梯度离心之后残留的粒细胞也会没有的，单核细胞可能就如倪老师所讲的，会有一点形态大小变化，和淋巴细胞区分不开了，所以用抗体标记的表达是非常准确的了