关于流式抗体

duanyt

老师你好，我准备做流式检测表面抗原分子，打算一个直标一个间标，现在买回来的抗体直标的是IgG2b亚型（rat anti-human/mouse fitc），间标均是IgG(一抗：rabbit anti-A，specific for A of human ，mouse，rat，bovine。二抗：goat anti-rabbit IgG(H+L) PE)，无亚型分类。请问老师这样可以将两种抗原混在一起做吗？加抗体的时候有什么注意点？
间标抗体说明上写着主要用于做免疫组化和Elisa等，还有个免疫荧光，这抗体可以做流式吗？如果可以，那可以用他们建议的用来做组化的推荐量吗？

谢谢老师！

niwanmao

1、理论上说，两种抗原是可以在一起检测的。
2、步骤上，我的建议是直标和间标一抗先一起孵育，然后用PBS洗涤1－2次后，再加入间标二抗。但话又说回来，如果细胞数量足够，建议最好是两种标记分开来检测，这样可以取得更好的灵敏度和特异度。
3、用量上，最好是通过抗体滴定，确定最佳浓度。组化的量可以作为参考，但建议略加大。