来，在微小残留病检测基础上加个白血病干细胞检测如何？

niwanmao

急性髓细胞白血病（AML）是成人最常见的急性白血病。最近，通过下一代测序（NGS）发现白血病克隆存在异质性和演变。这种异质性认为是源自白血病干细胞（LSC）。据推测，LSC可能对目前的化疗方案有抗性，并导致疾病的复发，因此具有深远的临床意义。

对于LSC，目前认为有不少标记，如CD123、CLL-1、CD97或TIM-3。原始细胞区域的CD34 + CD38-部分被认为是富含LSC的，但也包括正常的HSC。那么应该如何分析呢？

参考下图正常人骨髓，A图圈中原始细胞区域后，B图可圈选hematogones作为CD38＋参照，当然另外也可以用D图中的浆细胞做阳性对照，至于C图的区分，我个人觉得不妥，因为原始单核的CD36应该是阴性的，原始红细胞也是CD36阴性的（参见http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1541-1-1.html），至于D图将原始细胞区域分为几个区域，其中的P6才是我们关注的LSC所在区域：



在F图中，P6区域通过CD90和CD45RA表达进一步区分正常和恶性造血前体的几个阶段：
1、正常HSC：CD34 + CD38-CD90 + CD45RA-
2、多能祖细胞（MPP）：CD34 + CD38-CD90dimCD45RA-
3、淋系前驱多潜能祖细胞（LMPP）：CD34 + CD38-CD90-CD45RA +
4、白血病干细胞LSC：CD34 + CD38-CD90＋CD45RA +

下面看两例患者的LSC初诊和复查结果，A、B这例患者LSC初诊少，复查时反而增多，因此其分子生物学的MRD始终在0.01％水平，下不去，而C、D这例患者则复查时LSC显著减少（在此图中，我又看到一个有问题的地方，就是LSC应该是CD90＋CD45RA＋，而作者却在此图中圈了CD90－的区域，并且此图似乎存在补偿过度现象）：


这篇文章的图形中，存在较多漏洞，不过其中的思路我们可以借鉴，我们可以试着做得更好一些，将LSC与MRD联合起来，监测AML患者可能会更好。

参考文献：
Boyer T, Gonzales F, Plesa A, et al. Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up. J Vis Exp. 2018 Mar 26;(133). doi: 10.3791/56976.

hexiaoxiao

老师您好，我使用的骨髓血的单个核细胞提取，然后染CD34 CD38 ros 是否需要加染CD45呢