求助：同型对照的问题

qinyalu115

倪老师：

    我做的是CD339  上次问过您的
1   我准备买abcamde一抗(羊抗人IgG)，和FITC标记的驴抗羊IgG二抗 问题是经费的问题，二抗的同型对照很贵 100test  319美元 能不能不买同型对照啊
或者我买abcam的一抗 买Santa的二抗和同型可以吗？


2   还有 我测定细胞内两个蛋白 一个直标A 一个间标CD339   我先个问一下：我直标的荧光抗体(pe-A)是和羊抗人CD339抗体一起加 孵育后pbs洗涤后加驴抗羊Fitc的二抗 还是 先加羊抗人CD339抗体孵育后pbs洗涤 再加直标的荧光抗体(pe-A)和驴抗羊Fitc的二抗  这两种加抗体的方法有什么区别

3  还有加抗体的时候 抗体需要稀释吗 怎么稀释 如果不稀释，对结果影响大不大？

niwanmao

倪老师：

    我做的是CD339  上次问过您的
1   我准备买abcamde一抗(羊抗人IgG)，和FITC标记的驴抗羊IgG ...
qinyalu115 发表于 2010-8-16 18:25

                               
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1、可以不买同型对照，但是必须要用该标记表达阴性的细胞来做阴性对照。2、我倾向于第一种方法，因为我私下认为第一次结合总是最充分的，所以让两种一抗一起进行结合。但我未进行过比较。如果你哪位朋友有经验，可以在此谈谈。
3、抗体是否需要稀释可以看说明书，但最好的依据是抗体滴定。根据你的情况，还是参考说明书吧。

qinyalu115

谢谢倪老师！