利用PI单染分析死细胞活细胞的比例

pxt9098

第一次用流式细胞仪，想利用PI单染来分析死活细胞的比例，想请教一下大家我做出来的图为什么是下面这样的？怎样区分死细胞活细胞？

niwanmao

你做的是什么细胞？怎么感觉细胞都死了呢？

pxt9098

niwanmao 发表于 2018-5-3 08:17
你做的是什么细胞？怎么感觉细胞都死了呢？

第一幅图是L929细胞，第二幅图是B16细胞，但是MTT测的结果大概有50%是活的，我用的没有药物处理的细胞进行电压的调整，这样对吗？

niwanmao

pxt9098 发表于 2018-5-3 10:48
第一幅图是L929细胞，第二幅图是B16细胞，但是MTT测的结果大概有50%是活的，我用的没有药物处理的细胞进 ...

未经药物处理的细胞跑出来的图形发上来看看。

pxt9098

niwanmao 发表于 2018-5-3 19:26
未经药物处理的细胞跑出来的图形发上来看看。

这是正常细胞

niwanmao

pxt9098 发表于 2018-5-4 16:30
这是正常细胞

正常组和处理组的FSC/SSC电压是否一致？如果一致的话相差也太大了。正常组R1比例多少？

pxt9098

niwanmao 发表于 2018-5-4 19:39
正常组和处理组的FSC/SSC电压是否一致？如果一致的话相差也太大了。正常组R1比例多少？ ...

之前的实验电压没有一致，我又重复了一遍，想请教一下老师，我应该用正常的细胞做对照来调电压值和增益值？还是用正常细胞进行PI染色后再来调电压值增益值？
1.这是用正常细胞作对照调电压值的结果：
2.正常细胞PI染色后的结果：
为什么正常细胞一半都是死细胞？

niwanmao

pxt9098 发表于 2018-5-9 09:38
之前的实验电压没有一致，我又重复了一遍，想请教一下老师，我应该用正常的细胞做对照来调电压值和增益值 ...

你的PI浓度？染色时间？

pxt9098

终浓度为5ug/mL，染色1min

niwanmao

pxt9098 发表于 2018-5-9 17:53
终浓度为5ug/mL，染色1min

那应该是可以的。这个结果是可信的。你得从培养的细胞状态上或收集方法上找问题。