细胞摄取FITC的问题

hellomiit

一个癌细胞，24小时贴壁后，使用FITC（未标任何靶向分子，单纯的FITC分子）孵育2个小时，后做流式，100uMFITC细胞荧光阳性率都到90%了，10uM的FITC阳性率是11%。请问大神这有问题吗？细胞为什么也摄取FITC？100uM的都90%了。是我的操作的问题还是就是这样？

ghqiu09

应该把FITC连在不具有靶向任何分子的小分子，这样才是negative control。单独FITC会和细胞膜表面蛋白结合

niwanmao

你这实验目的是什么？
具体操作是什么样的？

hellomiit

Fitc是要用来做阴性对照，我选了一种具有靶向能力的小分子，小分子和FITC连在一起，未连任何靶向小分子的Fitc作为阴性组。24小时癌细胞贴壁后，加FITC、FITC-靶向小分子作用2个小时，PBS洗2次，胰酶消化，收集细胞，PBS重悬，洗2次，然后上机。谢谢

hellomiit

niwanmao 发表于 2018-5-10 07:52
你这实验目的是什么？
具体操作是什么样的？

Fitc是要用来做阴性对照，我选了一种具有靶向能力的小分子，小分子和FITC连在一起，未连任何靶向小分子的Fitc作为阴性组。24小时癌细胞贴壁后，加FITC、FITC-靶向小分子作用2个小时，PBS洗2次，胰酶消化，收集细胞，PBS重悬，洗2次，然后上机。谢谢

niwanmao

因为FITC小，可进入胞内，有文献报道过嗜酸粒细胞胞内的颗粒，可结合FITC，那么相信会有不少种类的细胞也会结合，所以会存在较明显的误差：
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10331630

像@ghqiu09  站友所说的，你可能应该以FITC结合非靶向分子拿来做阴性对照会更佳。