流式细胞仪激发波段的扩展

lyncee

        传统的流式细胞仪使用的是氩离子激光器，而它能提供的波长有限，这也限制了波长的选择。而二极管泵浦固态（DPSS）激光器技术的最新进展使得流式细胞仪可用的波长增加。流式细胞仪内的DPSS 532和561 nm激光正在变得越来越普遍，使得生物医学领域的研究者们把眼光投向了绿色或黄色激光的激发荧光探针。但是在黄色（561 nm）和红色的氦氖或者二极管激光器（630到640 nm）之间的空白很难填补。

        由于有相当数目的荧光探针-包括一些最新研制出来的可表达荧光蛋白-处于590~595 nm的激发波段之间，波长最长的红色荧光蛋白包括mPlum，TagFP635（学名mKate）和TurboFP635（学名Katushka）。这些蛋白需要的激发波长大于488 nm，但小于红色氦氖或二极管的波长。红色的激光对这些蛋白的激发效率很差，而594 nm波长的激光提供了这三种蛋白完美的激发效率。如何让流式细胞仪使用上橘色的激光是流式细胞仪激发能力的最后一个空白。

        几家激光器制造商最近开发了适合于荧光分析的激光器模块。比如德国Qioptiq波长为594 nm激光器。这种单模DPSS激光器在苛刻的荧光分析的应用中具有特别的吸引力，这样的应用有流式细胞仪。因为它提供非常良好的功率稳定性，非常低强度噪声，均方根值小于0.3％，和一个近乎完美的TEM00模，M2 <1.1的低发散光束，这都是流式细胞仪所需的性能。

        对于研究人员和仪器制造商而言，采用橘色这样的新的激发波长，适用的滤光片也是至关重要的。光学滤光片必须为特定的激光波长设计，同时在最大化荧光仪器的吞吐量，灵敏度和对比度中发挥着重要的作用。Semrock公司的LF594-A荧光滤光片组的光谱，适用于594 nm激光激发的荧光

Semrock还为包括594 nm激光在内的高达六个波段设计了多路滤光片，称之为LaserMUX。其可以结合多个激光束，同时具有超低的损失。这样的滤光片可以促进橘色激光加入到以流式细胞仪为代表的荧光分析仪器内。

总而言之，这些数据显示594 nm波长激光的加入会提高流式细胞仪对于细胞的分析能力。这个波长的激光填补了常见的561 nm激光和红色激光之间的空白。添加此波长的流式细胞仪就能够激发几乎任何可见的荧光探针。