调节性T细胞流式染色，破膜染核上Foxp 3表达很明显，但是细胞表面的CD4几乎没有了。

weifeng04 · 发表于 2018-6-7 18:05:15

今天进行小鼠淋巴结的调节性T细胞染色，运用eB的专门试剂盒，核蛋白Foxp3表达很明显，但不知道什么原因，CD4几乎没有。之前只做流式表面染色CD4表达很明显，不知道是不是因为破膜的关系导致的？不知哪位前辈能否告诉一些解决办法。

niwanmao · 发表于 2018-6-8 11:05:57

没有图，很难说。
因为如果你不通过CD3、CD4、CD25这样的设门，foxP3也可能是假阳性的。

weifeng04 · 发表于 2018-6-25 11:02:03

G:\流式中文网
倪老师，图片如图所示，CD4（之前做流式表面染色实验染色分群很明显）、CD25（新到抗体）直接没有染出来。我查了一下抗体类型，会不会是流式抗体之间非特异结合了，造成染色失败？但是流式直标抗体一般是特异性结合，我把抗体类型标出，请老师看看是否会有非特异结合。
CD4-FITC:来源于Rat IgG2b.κ，抗mouse/rat
CD25-PE/cy7:来源于Rat IgG1，抗mouse/human
Foxp3-APC：来源于Rat IgG2a.κ，抗mouse/rat

weifeng04 · 发表于 2018-6-25 11:04:21

niwanmao 发表于 2018-6-8 11:05
没有图，很难说。
因为如果你不通过CD3、CD4、CD25这样的设门，foxP3也可能是假阳性的。
...

G:\流式中文网
倪老师，图片如图所示，CD4（之前做流式表面染色实验染色分群很明显）、CD25（新到抗体）直接没有染出来。我查了一下抗体类型，会不会是流式抗体之间非特异结合了，造成染色失败？但是流式直标抗体一般是特异性结合，我把抗体类型标出，请老师看看是否会有非特异结合。
CD4-FITC:来源于Rat IgG2b.κ，抗mouse/rat
CD25-PE/cy7:来源于Rat IgG1，抗mouse/human
Foxp3-APC：来源于Rat IgG2a.κ，抗mouse/rat

weifeng04 · 发表于 2018-6-25 11:07:56

niwanmao 发表于 2018-6-8 11:05
没有图，很难说。
因为如果你不通过CD3、CD4、CD25这样的设门，foxP3也可能是假阳性的。
...

倪老师，图在这里。CD4因为没有染出，没有放。

niwanmao · 发表于 2018-6-25 16:07:48

weifeng04 发表于 2018-6-25 11:07
倪老师，图在这里。CD4因为没有染出，没有放。

如果CD4没有染出的话，就已经说明染色有问题了，所有的结果就都不可信了。

weifeng04 · 发表于 2018-7-18 16:27:58

niwanmao 发表于 2018-6-25 16:07
如果CD4没有染出的话，就已经说明染色有问题了，所有的结果就都不可信了。 ...

谢谢倪老师提醒，重新做了一次就出来了，也不知道第一次没出的原因。

ET生物人 · 发表于 2018-7-24 15:09:24

niwanmao 发表于 2018-6-25 16:07
如果CD4没有染出的话，就已经说明染色有问题了，所有的结果就都不可信了。 ...

我最近也在研究破膜染Foxp3，每次看到结果都发现固定破膜后CD25 CD127的阳性率明显降低，这是什么情况了？

niwanmao · 发表于 2018-7-24 22:11:47

ET生物人发表于 2018-7-24 15:09
我最近也在研究破膜染Foxp3，每次看到结果都发现固定破膜后CD25 CD127的阳性率明显降低，这是什么情况了 ...

可能是破膜剂的问题。建议更换破膜剂。

ET生物人 · 发表于 2018-7-25 08:50:56

niwanmao 发表于 2018-7-24 22:11
可能是破膜剂的问题。建议更换破膜剂。

已经试用几种破膜剂了，请问老师是用哪种的求推荐

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