找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 3465|回复: 4

浆细胞分化发育各阶段表型可以鉴别吗?

[复制链接]
发表于 2018-6-8 15:06:38 | 显示全部楼层 |阅读模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?加入流式中文网

×
『浆细胞分化发育各阶段表型可以鉴别吗?』这个问题是2017年流式中文网热心站友FCMao提的(http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5736-1-1.html),当时我在回复中只能提供一幅B细胞分化的详图,里面提到浆母和成熟浆之间的一些差异,人类浆母细胞CD19+、CD38high、CD27high、CD269+、MHCII+、CD20-、CD138-,而成熟浆细胞则CD19low、CD20-、MHCII-、CD38high、CD138+、CD269+、CD27+、CXCR4+:
BCellDevelopment.png

表格和实际的散点图还是不同的,落实到真实的分析中,如何去分析呢?还是有点难度的。

后来,还是FCMao站友特别认真,找到了一篇2009年Blood杂志上的好文章,将该问题圆满解决,这是流式中文网论坛功能的典型案例。

在此特地插一句,流式中文网论坛开设的目的除了分享技术以外,问答并不是单纯的你问我答,而是在你与我的互相讨论中,不断有众多站友参与,形成一个互动氛围,产生头脑风暴,最后将问题圆满解决,如同吃了一顿满汉全席,每人都各有收获,意犹未尽。

现在转回正题,我们将这篇Blood文章中的图片提出来,与大家分享,以后大家在浆细胞阶段的判断上、淋巴瘤的诊断上就会心里有数。

这篇文章的作者将人PBMC中的记忆B细胞提取出来之后,以细胞因子混合物培养,并以ODN等刺激,促使其在体外转化为浆细胞,从而得以对B细胞到浆细胞分化的各个阶段进行监测。

浆细胞体外生成的三个阶段
作者主要测了4个时间点,第0天、第4天、第7天、第10天。
第0天,B细胞主要是记忆B表型CD27+CD19+,S期只有0.5%±0.3%,小淋巴细胞形态;
第4天,部分变为活化B,细胞体积增大,CD20减弱,CD38逐渐增高,S期比例开始增高到38%±3%,另一部分已从活化B转变为浆母细胞,体积略缩小,但胞浆颜色变深,核浓缩,CD38进一步增高,CD20转阴,S期比例增高至50%±5%;
第7天,活化B细胞非常少了,大部分转变为浆母细胞,但浆母继续分化,增殖能力降低,细胞体积再次增大,这应该就是形态上常常提到的幼浆吧。此时S期比例降低,约13%±4%;
第10天,浆母细胞全部转变为成熟浆细胞,CD20-CD38++,不大分裂了,S期比例只有2%±0.1%。

结合下图和上面的文字,一起体会一下吧:
屏幕快照 2018-06-08 下午2.25.42.png

4个时间点的免疫球蛋白变化如何
作者还对这4个时间点的免疫球蛋白sIgM、sIgA、sIgG、cyIgM、cyIgA、cyIgG进行了测定。在第0天的记忆B细胞,免疫球蛋白均呈不温不火的表达,大多在25~43%之间;到了第4天活化B细胞降低,sIgM、cyIgM表达升高,sIgG水平降低;第7天浆母细胞阶段时,sIgM和cyIgM显著降低,sIgG降到最低点,但cyIgG升高到56%左右;到了最后的成熟浆细胞阶段,IgM和IgA均很低,sIgG也非常低,而cyIgG占绝对优势。
屏幕快照 2018-06-08 下午2.34.36.png

由此我们可以看出,从B到浆的分化过程, 就是IgM向IgG切换的过程。培养基中分泌的IgG、IgM、IgA测定,也证实了这一点。
屏幕快照 2018-06-08 下午2.46.41.png

核内转录因子的变化
细胞核内转录因子PAX5、BCL6、IRF4、PRDM1、XBP1在浆细胞分化过程中也发生明显的变化。PAX5是B细胞特异性标记,所以在分化过程中发生显著降低甚至缺失;BCL6也发生较明显的降低;IRF4在活化B阶段显著增高后,浆母和成熟浆变化不太大;PRDM1和XBP1在活化B和浆母细胞阶段略增高,到了成熟浆细胞阶段进一步增高达到高峰。
屏幕快照 2018-06-08 下午2.50.45.png

表型和归巢受体的表达变化
记忆B→活化B→浆母细胞→成熟浆细胞,4个阶段的CD19、CD27、CD45、MHC II、Ki67、CD43、CXCR5、CXCR4、CCR10、CD62L,均发生不同的变化。

CD19、CD45、MHCII荧光强度逐渐降低,但仍阳性;Ki67在活化B和浆母细胞表达达到高峰,到了成熟浆细胞又归于静寂,这与增殖一致;CD27、CD43、CD62L逐渐增高;CCR10从阴性逐渐转为阳性;CXCR5、CXCR4降低明显,呈阴性或弱阳性。
屏幕快照 2018-06-08 下午2.51.11.png

看到这里,浆母细胞与成熟浆细胞、浆母与B细胞之间的区别,你了解了吗?记不住,赶紧收藏起来备忘吧!

信源:Jourdan M, Caraux A, De Vos J, et al. An in vitro model of differentiation of memory B cells into plasmablasts and plasma cells including detailed phenotypic and molecular characterization. Blood. 2009 Dec 10;114(25):5173-81. doi: 10.1182/blood-2009-07-235960.(全文免费:http://www.bloodjournal.org/cont ... 14/25/5173.full.pdf
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-4-19 02:57:36 | 显示全部楼层
老师你好,为什么记忆B细胞活化后IgG会表达下降
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2020-4-19 12:13:55 来自手机 | 显示全部楼层
神内小白 发表于 2020-4-19 02:57
老师你好,为什么记忆B细胞活化后IgG会表达下降

没有显著差异的
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2023-3-18 16:12:37 | 显示全部楼层
MBCs、actBCs、PBs、PCs分别对应的是记忆B细胞、活化B细胞、浆母细胞、成熟浆细胞,这个想分离产生特异性IgG抗体的细胞,用什么marker为好,CD138吗
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2023-3-19 16:50:37 | 显示全部楼层
飞翔 发表于 2023-3-18 16:12
MBCs、actBCs、PBs、PCs分别对应的是记忆B细胞、活化B细胞、浆母细胞、成熟浆细胞,这个想分离产生特异性Ig ...

参见
抗体分泌细胞(ASC)是什么?如何分析?
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10360-1-1.html
(出处: 流式中文网)
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-11-13 19:30

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表