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[细胞增殖] 关于CFSE染色的问题

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发表于 2018-6-15 15:22:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
倪老师好,我想请教一下有关CFSE染色的问题。
我有一个实验,想要知道CD4和CD8细胞的增殖情况,对人外周血单个核细胞CFSE染色,刺激培养后的d4/d6/d8取样进行流式检测,检测内容为PE-CD3+APC-CD8+CFSE、PE-CD4+CFSE。(检测机器:BD C6)
CD8细胞的增殖情况可以理解。CD4细胞的CFSE在d6和d8时基本相同,但是比d4的时候还右移了,请问您知道这是什么原因吗?
如图:红色是d4天检测的;蓝色是d6天检测的;绿色是d8天检测的结果。

CFSE结果

CFSE结果


 楼主| 发表于 2018-6-21 08:30:36 | 显示全部楼层
哦?没有人来回答了。。。
发表于 2018-6-21 10:22:15 | 显示全部楼层
奇怪,都没注意到这个问题。
CD4细胞出现的问题,是否可能是附近的通道荧光渗漏引起?而且,不同次检测的时候,可能会存在一定的偏差
发表于 2020-1-6 22:41:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-6-21 10:22
奇怪,都没注意到这个问题。
CD4细胞出现的问题,是否可能是附近的通道荧光渗漏引起?而且,不同次检测的时 ...

倪老师,是不是死活染料和CD4的荧光都要避开与FITC荧光交叉,我的死活染料是BV510,CD4施PE荧光的,CFSE的电压太低,导致补偿无法调节
发表于 2020-1-7 19:45:38 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-1-6 22:41
倪老师,是不是死活染料和CD4的荧光都要避开与FITC荧光交叉,我的死活染料是BV510,CD4施PE荧光的,CFSE ...

最好是避免。
CFSE是染色浓度太低还是电压低?
发表于 2020-1-8 11:07:11 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-7 19:45
最好是避免。
CFSE是染色浓度太低还是电压低?

是电压,CSFE浓度是5uM的,电压230,电压低了和其他荧光的补偿很难调,尤其是PE
发表于 2020-1-8 14:05:36 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-1-8 11:07
是电压,CSFE浓度是5uM的,电压230,电压低了和其他荧光的补偿很难调,尤其是PE ...

调高电压试试。
发表于 2020-1-9 23:11:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-8 14:05
调高电压试试。

在染了CFSE之后上机,圈的是淋巴细胞群,如果把电压调高CFSE右侧的阳性峰就会超出10^5,我尝试过,调高电压到400时补偿很好调,但是阳性峰就跑出去了;今天又重新做了一下,发现用浓度0.5um的CSFE时,其电压为280,与PE之间的补偿在165,与BV510(死活染料)之间的补偿在110,是不是有点太高了?补偿可以调出来,就是太大了,这样的补偿可以用吗?
发表于 2020-1-9 23:44:14 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-1-9 23:11
在染了CFSE之后上机,圈的是淋巴细胞群,如果把电压调高CFSE右侧的阳性峰就会超出10^5,我尝试过,调高电 ...

最好有图传上来看看,如果实在不行,可用斜向十字门。
发表于 2020-1-9 23:46:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-9 23:44
最好有图传上来看看,如果实在不行,可用斜向十字门。

好的,今天没有把图拷下来,明天上图
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