NK细胞 IFN-γ染色

oAria

晚辈有两个问题想向各位前辈请教：

1. 最近使用BD的PerCP-Cy5.5来检测NK细胞（经过4-5个小时刺激并阻断高尔基体）IFN-γ。一开始同型对照（isotype单染）比实验组（IFNγ单染）更高。
后来买了Fc受体封闭剂，同型对照荧光强度有所下降（仍比空白对照高出不少），实验组荧光强度则没有明显的变化。开机用双蒸水洗机器时本底不高，空白对照本底也不高。
想请问，Fc受体封闭后，同型对照是否应该下降至空白对照的水平？ 实验组呢？

2. 另外一个问题是，使用CFSE+7-AAD染细胞时发现，过去CFSE在FL-2和FL-3均未见明显的荧光渗漏。但最发现，CFSE在FL-2和FL-3均有明显的荧光渗漏，需要调节1.5-2.5%左右的荧光补偿。并且在更换不同细胞（复苏6-7天的K562细胞/新鲜分离的人外周血PBMC）时，每更换一种细胞就需要调节一次荧光补偿。不知道这是染料的问题还是仪器的问题？

非常感谢！

niwanmao

1、胞内染色的Fc Block意义较小，因为不知道你的染色方案和检测图形，所以很难给出具体的解决方案。
2、不同细胞，性质不同，是允许这种情况的。