流式胞内染色求助

VortexDou

请问各位战友有没有用过ebioscience的打孔液（10X稀释至1X使用）？按照网站上给的说明书来看室温固定，洗去固定液后可以直接用打孔液稀释的抗体在室温下进行染色，请问真的不需要用打孔液额外孵育一段时间吗？而且染色是在室温下进行的吗？烦请用过的战友解答一下，谢谢！

此处为说明书网址https://www.thermofisher.com/se/ ... ry.html#cytoplasmic

niwanmao

第7步和第8步不是写着用2ml破膜剂洗涤两次吗？这其实就已经开始破膜作用了，之后再用100ul破膜剂＋抗体孵育，就已经在作用了。

他们这些破膜剂时间都太长，所以我才研发出了咱们流式中文公的MemMagician，时间短了，不用每次都得稀释：https://kdt.im/PhQvsr

VortexDou

niwanmao 发表于 2018-7-13 08:57
第7步和第8步不是写着用2ml破膜剂洗涤两次吗？这其实就已经开始破膜作用了，之后再用100ul破膜剂＋抗体孵育 ...

谢谢老师您的回复，主要是我之前做过的包内染色步骤里用打孔液重悬后在4度下有至少半小时的破膜时间，然后再用稀释的抗体染色。

另外还有一个问题，后面的染色步骤在室温下进行真的没有问题吗？

niwanmao

VortexDou 发表于 2018-7-13 18:49
谢谢老师您的回复，主要是我之前做过的包内染色步骤里用打孔液重悬后在4度下有至少半小时的破膜时间，然 ...

不同破膜剂，成份不同，步骤也会不同。
染色大多数都在室温下进行的。4度是很少数标记才会需要，得看你要标记的靶抗原是否受温度影响而出现非特异性染色。

VortexDou

niwanmao 发表于 2018-7-14 15:46
不同破膜剂，成份不同，步骤也会不同。
染色大多数都在室温下进行的。4度是很少数标记才会需要，得看你要 ...

好的，谢谢老师！