细胞凋亡加药组十字门左上细胞占10%，原因是什么

Melodygogogo

流式新手求助各位大神，用细胞凋亡实验检测药物是否会诱导细胞凋亡，加药组十字门左上区域细胞占比10%，查资料说这个区域的细胞是由于仪器误差等等原因造成的，是这样吗？
感谢大家！

niwanmao

不是误差，应该是细胞坏死。但是凋亡信号几乎没有，Annexin V或者Annexin V的染色有没有问题？

Melodygogogo

niwanmao 发表于 2018-7-25 12:37
不是误差，应该是细胞坏死。但是凋亡信号几乎没有，Annexin V或者Annexin V的染色有没有问题？ ...

谢谢老师的回答，我的实验目的是想证明药物不会引发细胞凋亡，所以凋亡的细胞很少。十字门左上是Annexin-V阴性/PI阳性的细胞，网上说法不一，有的说是坏死，有的说是无法解释的细胞类型，请老师解惑。

niwanmao

Melodygogogo 发表于 2018-7-25 12:41
谢谢老师的回答，我的实验目的是想证明药物不会引发细胞凋亡，所以凋亡的细胞很少。十字门左上是Annexin- ...

就是死细胞。不是无法解释。

Melodygogogo

niwanmao 发表于 2018-7-25 12:47
就是死细胞。不是无法解释。

请问老师，10%的坏死细胞可以接受吗？是不是我的样品处理不当，让细胞有机械损伤呢？可以得出药物不会诱导凋亡的结论吗？

niwanmao

Melodygogogo 发表于 2018-7-25 12:50
请问老师，10%的坏死细胞可以接受吗？是不是我的样品处理不当，让细胞有机械损伤呢？可以得出药物不会诱 ...

如果是处理的问题，你其它组没有这么高啊。FSC/SSC散点图是否有改变？

tiger

Melodygogogo 发表于 2018-7-25 12:50
请问老师，10%的坏死细胞可以接受吗？是不是我的样品处理不当，让细胞有机械损伤呢？可以得出药物不会诱 ...

你样品处理可能有问题，细胞培养上清丢弃了吧？你培养的细胞再好，也不可能几乎看不到凋亡。

Melodygogogo

tiger 发表于 2018-7-25 16:41
你样品处理可能有问题，细胞培养上清丢弃了吧？你培养的细胞再好，也不可能几乎看不到凋亡。 ...

没有丢掉上清，全部都有收集。我的细胞是3T3-L1前脂肪细胞，属于正常细胞，是不是因为这样，所以凋亡的细胞比较少？

Melodygogogo

niwanmao 发表于 2018-7-25 13:50
如果是处理的问题，你其它组没有这么高啊。FSC/SSC散点图是否有改变？

老师，这个是FSC/SSC散点图，我觉得好像没有太大变化，您看呢？

tiger

Melodygogogo 发表于 2018-7-27 10:58
老师，这个是FSC/SSC散点图，我觉得好像没有太大变化，您看呢？

FSC的阈值太大了