人的Treg分群

xin373

最近做了人的外周血Treg，结果有些奇怪，还请老师指导~
图1和图2是病人外周血，经过通透的细胞，CD4/CD25/FoxP3 和CD4/CD25/CD127，淋巴细胞的分群相对明显，CD4分群很清楚；图3的是同一个病人的外周血，未经过通透的细胞，CD4/CD25/CD127，淋巴细胞的分群几乎找不到，CD4分群完全没有。很奇怪，不知道为什么~CD127和FoxP3都是PE的，所以坐标并未更换，都是FoxP3~



图1：外周血通透后CD4/CD25/CD127


图2：外周血通透后CD4/CD25/FoxP3


图3：外周血未通透CD4/CD25/CD127

xin373

补充一下， 图3的G1门我缩到很小，并来回挪了位置，都找不到有CD4的分群~

niwanmao

破膜后细胞碎的差不多了。所以染不上吧。

至于CD4、CD25、CD127那管，你用CD4设门后，后一个散点图用CD25/CD127.

xin373

倪老师，染不上的是未破膜的……破膜的反而染的上……

niwanmao

xin373 发表于 2018-7-31 19:22
倪老师，染不上的是未破膜的……破膜的反而染的上……

我是说你的CD4，破膜后没染上是因为细胞死的差不多了。至于CD25和CD127，那是非特异性结合，不是真阳性。

xin373

哦哦，所以破膜后那个结果是不可信的，明白了，倪老师。可是为什么我未破膜的表抗染色，CD4染不上呢？这个外周血的细胞状态也不是很好，是不是破膜没破好？

xin373

我也一直在想，这种纯表抗染色，是不是在纯血中先加入抗体，再破膜？

niwanmao

xin373 发表于 2018-8-1 12:28
哦哦，所以破膜后那个结果是不可信的，明白了，倪老师。可是为什么我未破膜的表抗染色，CD4染不上呢？这个 ...

再看了下，你图上标的和图片注释没对上，那么是CD127是染上的，而FoxP3这管全是死的，是FoxP3这管没染上。

你这几个除了FoxP3管，其它两管的CD4都染上的呀。
至于表面标记的顺序，建议先用全血和抗体孵育后，再进行裂解或者固定破膜。