PBMC 中分选CD4T和CD14,最好能分CD8

qscdawx

各位老师，请教一下，我想从PBMC 中分CD4T细胞和单核细胞，那我是CD4阳选单核阴选好，还是单核阳选CD4阴选好？好像单核也有一些会表达CD4,CD4阳选的话，会不会导致损失一部分的单核细胞，这部分损失在可接受范围内吗？

liuruiluna

样本有多少，是正常人的血吗？下游实验对各群细胞需要多少呢？因为样本很少所以一定要做依次分选吗？

niwanmao

可以用流式嘛

qscdawx

niwanmao 发表于 2018-9-10 21:05
可以用流式嘛

不好意思，我们这边没有能sort的流式仪

qscdawx

liuruiluna 发表于 2018-9-10 18:37
样本有多少，是正常人的血吗？下游实验对各群细胞需要多少呢？因为样本很少所以一定要做依次分选吗？ ...

我们是购买的PBMC，然后CD14+在15%左右，CD4+在24%左右，CD8+在20%左右，要用三种细胞做不同的实验，如果能仪器分离出来的话就比较节省一些吧

niwanmao

qscdawx 发表于 2018-9-11 13:47
不好意思，我们这边没有能sort的流式仪

现在外面提供分选服务的学校或公司很多呀。

qscdawx

niwanmao 发表于 2018-9-11 17:37
现在外面提供分选服务的学校或公司很多呀。

最纠结的就是附近都没有能sort的流式。如果需要用sort的需要做公交2个多小时去别的地方。倪老师，问下用磁珠应该也没啥问题吧

niwanmao

qscdawx 发表于 2018-9-11 17:45
最纠结的就是附近都没有能sort的流式。如果需要用sort的需要做公交2个多小时去别的地方。倪老师，问下用 ...

如果你真要用磁珠分PBMC中的CD4＋T，为什么不用CD3阳选之后，再用CD4阳选呢？

liuruiluna

依次分选可以先从含量少的分选起，一步一步正选，最后一种细胞用负选。不过你这样一个一个选下去，时间也要很久，两个小时也打不住，最好是看看起始样本，按照你所需的细胞数把样本分为几份，分别去选，这样时间也短，细胞活性更好。

liuruiluna

你只分两种细胞，如果样本真的比较少需要做依次分选的话，那差不多应该是先正选CD14  ,剩下的细胞离心，重悬，然后负选CD4