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多色流式，是将流式单细胞检测能力发挥到极致的趋势性技术，颜色越多，从每个细胞上面获得的信息就越多。
但是，多色流式，是目前流式技术的一个痛，尽管质谱流式解决了这个痛点，但高昂的成本，使得质谱流式给普通用户又设了一道门槛。
所以，做好当前常规流式的多色方案设计，就成了必须做的一件事情。
这里有个Abcam出的简洁版PDF，将多色流式设计分为5步，值得大家参考（https://docs.abcam.com/pdf/immunology/multicolor-flow-cyometry-panel-design.pdf），在此将此PDF简介一下，同时穿插一些相关资料辅助解读。
1、了解你的流式细胞仪，包括激光器和滤光片
2、了解你要检测的细胞群体需要通过检测哪些抗原来区分，这些抗原的表达量如何？通常低表达或未知表达量的抗原用高亮度的荧光素，而高表达的抗原可用弱的荧光素：
说到这里，肯定有FLOWER会问，究竟哪些荧光素亮，哪些是弱的呢？不急，热心的Biolegend提供了一张表，他们用各种荧光素标记的CD4检测单个核细胞，通过形成的直方图来评估各种荧光素的染色亮度，排序如下（https://www.biolegend.com/brightness_index），这可以作为荧光素亮度选择的一个依据：
Fluorophore | Ex (nm) Max | Em (nm) Max | Filter Used | Brightness | Histogram | PE | 565 | 575 | 585/20 | 5 | | PE/Cy5 | 565 | 670 | 660/20 | 5 | | PE/Dazzle™ 594 | 565 | 610 | 610/20 | 5 | | Alexa Fluor® 647 | 650 | 668 | 660/20 | 4 | | APC | 650 | 660 | 660/20 | 4 | | Brilliant Violet 421™ | 405 | 421 | 450/50 | 4 | | Brilliant Violet 711™ | 405 | 711 | 710/50 | 4 | | PE/Cy7 | 565 | 774 | 780/60 | 4 | | PE/Fire™ 780 | 565 | 774 | 780/60 | 4 | | Brilliant Violet 605™ | 405 | 603 | 610/20 | 3 | | Brilliant Violet 650™ | 405 | 645 | 660/20 | 3 | | Brilliant Violet 750™ | 405 | 750 | 780/60 | 3 | | Brilliant Violet 785™ | 405 | 785 | 780/60 | 3 | | Alexa Fluor® 700 | 696 | 719 | 720/45 | 2 | | APC/Cy7 | 650 | 774 | 780/60 | 2 | | APC/Fire™ 750 | 650 | 787 | 780/60 | 2 | | PerCP/Cy5.5 | 482 | 690 | 695/40 | 2 | | PerCP/Cyanine5.5 | 482 | 690 | 695/40 | 2 | | Alexa Fluor® 488 | 495 | 519 | 530/30 | 1 | | Brilliant Violet 510™ | 405 | 510 | 510/50 | 1 | | Brilliant Violet 570™ | 405 | 570 | 585/42 | 1 | | FITC | 493 | 525 | 530/30 | 1 | | Pacific Blue™ | 410 | 455 | 450/50 | 1 | | PerCP | 482 | 675 | 695/40 | 1 |
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3、最小化荧光渗漏。对于比较重要的检测指标，尽量使用No Overlap的两个荧光通道：
4、尽量包含以下的对照：
未染色对照
死活染色
单染阳性对照，设置补偿
FMO对照，设置阳性门
5、尽管通过上面几步可以很好的完成实验了，但做好第5步，可以使实验结果更稳定可靠，就是滴定抗体、Fc阻断：
怎么样？看完这本“爬山”攻略，对征服这座大山有信心吗？
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发表于 2018-9-11 19:18:17
发表于 2018-9-13 10:15:31
