Balce小鼠胸腺和脾脏比例不正确，看图有什么问题吗？

我是二十

取Balce小鼠胸腺和脾脏，胸腺染色CD3-FITC，CD4-PE；脾脏染色CD3-FITC，CD4-PE，CD8-PerCP，做了几次，发现很多问题，希望各位大神老师能够指教
1. 胸腺中CD3的比例是45.8%，CD4的比例是83.13%，为什么CD4的比例会这么高？和抗体有关吗？还是存在没有裂解完全的红细胞？
2.脾脏中CD4和CD8的比例不对，散点图中的比例和直方图中的比例不统一/?
3.脾脏图中细胞出现火箭峰，代表都是死细胞吗？
4.为什么细胞感觉都散开了，不聚团？
我之前跑的C57小鼠的胸腺中CD4和CD8都不是这样的

THY

SP-未染色

SP-染色

C57-Thy

niwanmao

1、胸腺细胞的CD8有没有染？由于有较多的CD4+CD8+细胞，所以你单看CD4肯定如此。
2、脾脏的CD4、CD8补偿没有调好。不知道你为什么这么喜欢直方图，一旦做了多色标记，一定要看散点图，注意补偿。
3、4 不知道你指的是什么？

ssssssss

我的配色和你一样，我的CD4和CD8双阳性也是比较多，补偿也调了，还是双阳性比较多，我怀疑机器问题，你的问题解决了吗？