细胞核内P-stat3 、P-stat5、P-erk测不出来，求指导

snelgar

测病毒感染后淋巴细胞核内P-stat3 、P-stat5、P-erk等表达情况，用的是BD Phosflow 抗体，BD的Lyse/fixation buffer、 perm buffer III ，按照论坛里的BD测磷酸化指标的protocol，发现如下问题，1.破膜后淋巴细胞分群还可以，碎片特别多，淋巴群数量少了一半以上，请问需要调整破膜时间吗？（破膜选的是）2. p-erk有微弱表达， 但P-stat3 、P-stat5表达不明显，是否和所用的破膜剂有关系，如何改进，谢谢

niwanmao

参考这篇：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6525-1-1.html。看完之后，你应该就能做出来了。

snelgar

谢谢，看来不能迷信现成试剂。破膜后碎片很多，淋巴细胞减少了50%，是不是减少太多了，一般减少多少合适，谢谢

snelgar

niwanmao 发表于 2018-9-27 20:11
参考这篇：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6525-1-1.html。看完之后，你应该就能做出来了。 ...

多谢版主，还有个问题

snelgar

niwanmao 发表于 2018-9-27 20:11
参考这篇：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6525-1-1.html。看完之后，你应该就能做出来了。 ...

破膜后碎片很多，淋巴细胞减少了50%，是不是减少太多了，一般减少多少合适，谢谢

niwanmao

snelgar 发表于 2018-9-27 20:26
破膜后碎片很多，淋巴细胞减少了50%，是不是减少太多了，一般减少多少合适，谢谢 ...

所谓的淋巴细胞减少，是由于碎片多，导致的相对减少，并非是真的减少。
所以每次流式分析前几个门里面，必有一个排除碎片的门。只有排除碎片之后，计算某某细胞的比例，这才是正确的做法。

snelgar

niwanmao 发表于 2018-9-28 10:37
所谓的淋巴细胞减少，是由于碎片多，导致的相对减少，并非是真的减少。
所以每次流式分析前几个门里面， ...

谢谢指导