绝对计数BD Trucount

普鲁卡因 · 发表于 2018-10-10 01:32:28

想做脊髓流式浸润单核巨噬的绝对计数但制备单细胞悬液时各组之间细胞总数不一致染色过程还要清洗这样能做绝对计数吗感觉只是相对计数还不准确不知道是否可行小白求助高手

niwanmao · 发表于 2018-10-10 21:45:03

洗涤倒是问题不大，只要去上清的时候，尽量多留液体，不太会丢失。
但是制备单细胞悬液的时候，处理成单细胞的效率，会比较容易受影响，而且你使用的脊髓体积如何测量呢

普鲁卡因 · 发表于 2018-10-10 23:18:14

十分感谢倪老师的回复！我们是比较各实验组MDM绝对数的变化可是我们没办法控制一个各组比较的标准前提假设我们称相同重量的腰膨大去分离中枢神经系统的单个核细胞的话但percoll分离后各组之间吸上来的细胞就不一致怎么控制各实验组之间的可比性呢

niwanmao · 发表于 2018-10-11 08:26:20

普鲁卡因发表于 2018-10-10 23:18
十分感谢倪老师的回复！我们是比较各实验组MDM绝对数的变化可是我们没办法控制一个各组比较的标准前提假 ...

我个人的建议：
称取相同重量的腰膨大之后，用机械法制备单细胞悬液，显微镜下计数总细胞量。最后检测直接分析百分比，乘以之前计算出的总细胞量，就可得各类细胞的绝对数。

普鲁卡因 · 发表于 2018-10-11 21:50:31

谢谢倪老师～既然不用计数管精确来计数算出外周浸润的单核巨噬在所有单个核细胞的比例来分析应该就可以了吧

niwanmao · 发表于 2018-10-11 23:33:42

普鲁卡因发表于 2018-10-11 21:50
谢谢倪老师～既然不用计数管精确来计数算出外周浸润的单核巨噬在所有单个核细胞的比例来分析应该就可以了 ...

是的

普鲁卡因 · 发表于 2018-10-12 19:35:06

嗯嗯感谢倪老师的解答

wmj123456 · 发表于 2024-10-29 22:36:30

niwanmao 发表于 2018-10-10 21:45
洗涤倒是问题不大，只要去上清的时候，尽量多留液体，不太会丢失。
但是制备单细胞悬液的时候，处理成单细 ...

倪老师，请教个问题，用微球法对外周血淋巴绝对计数时，加样枪反向吸样，打血液到流式管时，最后会剩余一滴血液，这滴血液通常是舍弃还是需要继续滴到流式管里？

niwanmao · 发表于 2024-10-30 07:51:39

wmj123456 发表于 2024-10-29 22:36
倪老师，请教个问题，用微球法对外周血淋巴绝对计数时，加样枪反向吸样，打血液到流式管时，最后会剩余一 ...

反向加样，应使吸头紧贴管壁或管底附近加，不是隔空打的

wmj123456 · 发表于 2024-10-30 13:56:34

niwanmao 发表于 2024-10-30 07:51
反向加样，应使吸头紧贴管壁或管底附近加，不是隔空打的

倪老师，是的啊，但是最后打完之后，还会剩余一滴血液悬空着，没有完全打到流式管底，这滴血液我觉得还是需要继续加到流式管吧，因为比较担心这一滴血液会否影响绝对计数结果

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