全血血小板流式分析

W3YC · 发表于 2018-10-14 16:09:26

请问各位老师
实验室小白目前在做人血小板活化功能
看了许多文献都是全血分析血小板
文献给出的图片如下图

原始文献中流式

可以看出血小板的分布
而我的为

我试验显示的流式

整个都黏附在一起的

用的我自己的血做的
采用的3.2%柠檬酸钠管，
5ul全血+5ul CD41+35ulpbs
另外用稀释血做过，40ul全血+800ulPBS
取20ul稀释血+5ulCD41 15分钟温育
加2mlPBS上机
不知道哪里出了问题

niwanmao · 发表于 2018-10-15 08:59:03

看软件界面，感觉是某台机器，不作评论。

你可以换台其它品牌的机器试试看。

W3YC · 发表于 2018-10-30 00:03:04

niwanmao 发表于 2018-10-15 08:59
看软件界面，感觉是某台机器，不作评论。

你可以换台其它品牌的机器试试看。 ...

谢谢倪老师，后来实验室有师姐帮我调整以后可以出现分群的图像了
倪老师我想请教
①抗体饱和这个问题，说明书上的原话是“One test corresponds to labeling of up to 10^6 cells in a total volume of 100 µL ”
因为血小板很娇气，特别容易就活化了，为了避免振荡，之前我的参考文献都没有洗标本，故我也没有洗，不存在把多余抗体洗掉，之前的文献也是说把抗体滴定到饱和，这个问题像请教老师，我该怎么处理
②基本我每次收20万个颗粒，病人情况差一些的话，20万个颗粒里面只有1000个血小板，是不是1000个细胞测MFI不太准确？有时候直方图是很低很散的，我该怎么办呢？

niwanmao · 发表于 2018-10-30 07:48:27

W3YC 发表于 2018-10-30 00:03
谢谢倪老师，后来实验室有师姐帮我调整以后可以出现分群的图像了
倪老师我想请教
①抗体饱和这个问题，说 ...

1、血小板容易活化，其实之前抽血就存在这个概率，染色之后再洗涤，不会使血小板活化而结合抗体的，因为抗体已经被洗掉了。
抗体滴定，是为了寻找最佳用量，即在那个用量时，阳性群和阴性群隔的最开。
2、对于单群的，1000个也勉强够。如果想取得多，可以选择只保存P4门内的细胞，使其获取到20万，对于血小板获取到20万没有任何问题

W3YC · 发表于 2018-10-30 17:46:32

niwanmao 发表于 2018-10-30 07:48
1、血小板容易活化，其实之前抽血就存在这个概率，染色之后再洗涤，不会使血小板活化而结合抗体的，因为 ...

倪老师感谢您的耐心恢复
我打算尽快完成抗体滴定
但是目前有一个问题，血小板不像白细胞或者红细胞，它变数很大，我们科室患者血小板10-200多不等，滴定抗体前需要固定所测细胞数。但是每个血样的血小板计数就是不一样的，我是不是有关按不同的细胞数滴定抗体，每次实验前先明确这个血样里大致的血小板数量，然后再给不同的抗体量
只是这样实施起来太麻烦

niwanmao · 发表于 2018-10-30 21:01:17

W3YC 发表于 2018-10-30 17:46
倪老师感谢您的耐心恢复
我打算尽快完成抗体滴定
但是目前有一个问题，血小板不像白细胞或者红细胞，它变 ...

滴定，主要是根据总体积，细胞数量相差10倍以内对滴定结果无太大影响。

W3YC · 发表于 2018-10-31 00:23:09

niwanmao 发表于 2018-10-30 21:01
滴定，主要是根据总体积，细胞数量相差10倍以内对滴定结果无太大影响。

非常感谢倪老师

hydwl2019 · 发表于 2023-10-4 16:59:42

W3YC 发表于 2018-10-30 00:03
谢谢倪老师，后来实验室有师姐帮我调整以后可以出现分群的图像了
倪老师我想请教
①抗体饱和这个问题，说 ...

你好，请问你是怎么把分群调出来的呢

AAAAAjjj · 发表于 2023-10-8 10:36:24

hydwl2019 发表于 2023-10-4 16:59
你好，请问你是怎么把分群调出来的呢

上机收集数据的时候更改电压和阈值

W3YC · 发表于 2023-10-10 15:20:34

hydwl2019 发表于 2023-10-4 16:59
你好，请问你是怎么把分群调出来的呢

是的，主要是把电压调好就出来了，那会还是2018年，现在很多机子的电压都很好调，分群很容易就出来了，最右下角就是血小板

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