流式小白：对荧光标记的细胞做凋亡双染如何染色

Roya

未做过流式，最近打算做一次预实验，有几个问题想请教一下：
1、我需要对荧光标记的抗体结合的目标细胞做凋亡双染，荧光结合的目标细胞只有5000到6000个/ml，这个细胞量可以测凋亡吗？
2、荧光标记时，先孵育标记目标细胞的荧光抗体再孵育凋亡双染，还是可以将标记目标细胞的荧光抗体和凋亡双染共同孵育呢？
3、如果是有先后顺序的染色，先染色目标细胞后，wash buffer 洗涤两次再用凋亡双染缓冲液吹起细胞后加双染染液就可以了吗？
4、如果是可以同时染，是否可以将三种荧光抗体稀释液按比例混匀后，均匀加入不同样本中孵育呢？

5、做预实验时，需要设置同型对照吗，如果需要的话，未染色的细胞可以做同型对照吗？

niwanmao

1、1ml才这点细胞数量，太稀了，总量多少？
2、3、4、5、荧光抗体配色和凋亡标记物的通道不冲突就可以一起做，但是难度会很大，新手不建议一起做。

Roya

niwanmao 发表于 2018-11-25 18:59
1、1ml才这点细胞数量，太稀了，总量多少？
2、3、4、5、荧光抗体配色和凋亡标记物的通道不冲突就可以一起 ...

谢谢倪老师的回复，总量15000-18000（3ml），目标细胞荧光抗体是缀合PE，凋亡标记物分别为FITC和PI，不好意思老师，还有个问题想麻烦您详细说一下对初学者来说，难度主要出现在哪几个方面，谢谢老师~