流式检测肿瘤组织制成的单细胞悬液里的CD4和CD8细胞比例.....

dchyy

获得小鼠肿瘤组织，剪子剪碎至小米粒大小，甚至还小。然后胶原酶（3mg/ml),每样3ml，37度消化15分钟后拿出来吹散，接着放10分钟。然后70um筛网过滤，取滤液，加裂解红细胞液，室温15分钟，800g,5min。然后计数，加细胞，加抗体，加细胞固定液，第二天上机。做出来的细胞比例，CD4和CD8只有0.1%，不同组别之间没有差异，不知道问题出在哪里？请大家给意见。谢谢！

dchyy

细胞固定液为4%多聚甲醛，细胞级

niwanmao

细胞活力如何？可能细胞均死亡，导致标不上去。

ghqiu09

你这个是肿瘤组织样品，这么低很正常吧

dchyy

niwanmao 发表于 2018-11-28 08:38
细胞活力如何？可能细胞均死亡，导致标不上去。

细胞活力没问题。其他细胞比例很好。

niwanmao

dchyy 发表于 2018-11-28 12:47
细胞活力没问题。其他细胞比例很好。

最好能够有图或者原始数据，这样找原因会容易一些。

luvianlamia

你好，我想请教一个问题。肿瘤组织制成的单细胞悬液里面应该大部分是肿瘤细胞，目标细胞群多吗？设门的时候是怎样排除的呢？

mybiosciences

1.不要加固定液，加上一个死细胞染料，排除死细胞
2.要加Fc受体阻断剂
3.加CD3了吗？最好再加个CD45排除一下肿瘤细胞

wmj123456

ghqiu09 发表于 2018-11-28 10:00
你这个是肿瘤组织样品，这么低很正常吧

请问下，肿瘤组织里的CD4和CD8的比例有大概的范围吗？如果是百分之几，这种情况正常吗？

柳暗花明

wmj123456 发表于 2024-1-30 23:12
请问下，肿瘤组织里的CD4和CD8的比例有大概的范围吗？如果是百分之几，这种情况正常吗？ ...

肿瘤免疫细胞比例怎么样都可能的，看是什么肿瘤，肿瘤发展到什么阶段了，以及样本的制备和检测。
从他的沟通来看，可能是
（1）固定太长时间，导致荧光猝灭
（2）固定太长时间导致抗原丢失了
（3）没有找到淋巴细胞的群体，肿瘤中淋巴细胞比例较低，需要先找到淋巴细胞群体，再去分析CD3，然后再分析CD4，CD8
（4）上面的建议很好。
①先做死活，在活细胞中分析，没有立刻上机，可能有较多的死细胞；
②然后检测CD45，找到淋巴细胞，肿瘤中细胞种类很多，不同细胞的本底不同，很难分群；
③染CD3，找到T细胞；CD4，CD8不只在T细胞中表达
④最后分析CD4+T/CD8+T细胞。