求问大鼠肺泡巨噬细胞极化的表面标记选择正确与否

xiao1203

SD大鼠，取肺泡灌洗液后提取巨噬细胞来检测极化表型，现在是表面标记抗体已经买了，并不知道对不对，以及对照的设置等等，请各位大神帮忙分析分析，思路如下：先用APC-CD11b标出巨噬细胞群，然后用的是PE-CD86标记M1型巨噬细胞，FITC-CD206标记M2型巨噬细胞，之后CD11b+和CD86+的为M1型巨噬细胞，CD11b+和CD206+的为M2型巨噬细胞。



这样设计是否正确？是否需要设计同型对照和FMO对照？如果不对的话请问如何改正呢？

还请各路神仙帮帮忙，叩谢！！！

niwanmao

可以完全参考这篇文章《Flow Cytometric Analysis of Macrophages and Dendritic Cell Subsets in the Mouse Lung》：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3824047/

xiao1203

niwanmao 发表于 2018-12-6 08:03
可以完全参考这篇文章《Flow Cytometric Analysis of Macrophages and Dendritic Cell Subsets in the Mous ...

如果不谈标记正确与否，这样设计三种荧光需要同型对照或者FMO对照吗？

niwanmao

xiao1203 发表于 2018-12-8 23:00
如果不谈标记正确与否，这样设计三种荧光需要同型对照或者FMO对照吗？

需要。
但有两点需要关注：
1、用死活染料排除死细胞。
2、需要阻断，降低Fc片段引起的非特异性结合。

gaoshengzz

niwanmao 发表于 2018-12-6 08:03
可以完全参考这篇文章《Flow Cytometric Analysis of Macrophages and Dendritic Cell Subsets in the Mous ...

老师，您好，请问下大鼠的指标也可以参考小鼠的指标么？您提供是小鼠的文献.

niwanmao

gaoshengzz 发表于 2019-4-30 17:15
老师，您好，请问下大鼠的指标也可以参考小鼠的指标么？您提供是小鼠的文献. ...

你提醒的对，是我疏忽了，大鼠参考这篇：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27805599

大多数指标可参考。

gaoshengzz

niwanmao 发表于 2019-4-30 22:59
你提醒的对，是我疏忽了，大鼠参考这篇：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27805599

大多数指标可参 ...

非常感谢，谢谢倪老师。

xiao1203

niwanmao 发表于 2018-12-9 20:28
需要。
但有两点需要关注：
1、用死活染料排除死细胞。

请问老师，大鼠巨噬细胞进行Fc阻断是不是使用大鼠自身的1%血清？

niwanmao

xiao1203 发表于 2019-5-15 17:21
请问老师，大鼠巨噬细胞进行Fc阻断是不是使用大鼠自身的1%血清？

一般mouse IgG1anti-rat CD32 monoclonal antibody多见一些。

cos_hai

niwanmao 发表于 2018-12-6 08:03
可以完全参考这篇文章《Flow Cytometric Analysis of Macrophages and Dendritic Cell Subsets in the Mous ...

倪老师，可是这篇文章没有具体的m1m2的maker,肺泡巨噬细胞会不会不表达cd86呢