流式测得的细胞都在坐标轴上怎么破？求大家讲解怎么补...

小江

刚接触流式的小白，求各位老师慷慨解答。  我是用AnnexinV-FITC/PI双染做了一个细胞凋亡实验，因为自己不怎么会操作就让一个师姐帮我操作的，她是先用正常的裸细胞调了电压，使得细胞都落在左下象限，然后测了两个单染（据说是调补偿，我也不是很懂），然后就用这个参数去测加了诱导细胞凋亡的诱导剂处理的细胞，结果就出来了如图所示的结果，右上象限有好多细胞都没有显示。我想问问大家，那些荧光大于10的4次方的细胞到底是收集到了没？收集到了没有显示？或者是都收集到了，只是显示在坐标轴的边缘？我如果这样画门的话，右上象限显示的百分比包括荧光大于10的4次方的细胞吗？或者有什么方法可以把荧光大于10的4次方的细胞调出来？
  实在感谢大家，由于用的学校公共仪器，做一次好麻烦，不知道需不需要重做，求各位老师解答！实在感谢！！@niwanmao 此处@一下倪老师，希望倪老师也可以帮忙解答，小生感激涕零~

yxzxlmlf

如果不是染色出问题，调完电压后未凋亡的正常活细胞还是在左下角的。flowjo上你用双指数坐标看看。未染色的细胞调节电压后还需要用空白对照组染色细胞确认下电压

niwanmao

十字门右移到分界明显处。
超出坐标上限的信号还在，只是统一收集成了最大值，所以比例仍正确的。

ghqiu09

仪器是谁家的？什么型号，现在好些的信号都可以检测到10^7以上。你先看看调坐标轴能不能调出来，如果超范围了应该就是一条直线了。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2018-12-22 10:52
十字门右移到分界明显处。
超出坐标上限的信号还在，只是统一收集成了最大值，所以比例仍正确的。 ...

超出坐标上限的信号还在，只是统一收集成了最大值，所以比例仍正确的。
是所有的流式仪都是这样的嘛？我一直以为超出坐标的部分是被切掉了

小江

谢谢老师的回复~
  我这就是用的log axis，应该就是您说的双指坐标吧，我用裸细胞调了电压，然后对照组的细胞是在左下象限，不知道就怎么成这样了。

小江

yxzxlmlf 发表于 2018-12-22 10:14
如果不是染色出问题，调完电压后未凋亡的正常活细胞还是在左下角的。flowjo上你用双指数坐标看看。未染色的 ...

谢谢老师的回复~
  我这就是用的log axis，应该就是您说的双指坐标吧，我用裸细胞调了电压，然后对照组的细胞是在左下象限，不知道就怎么成这样了。

小江

niwanmao 发表于 2018-12-22 10:52
十字门右移到分界明显处。
超出坐标上限的信号还在，只是统一收集成了最大值，所以比例仍正确的。 ...

谢谢倪老师的回复~
  那超出上限的信号有什么方法可以让它显示出来吗？我用flowjo把横纵坐标调大了之后，10的4次方之后的显示不了，审稿人会不会质疑

小江

ghqiu09 发表于 2018-12-23 15:42
仪器是谁家的？什么型号，现在好些的信号都可以检测到10^7以上。你先看看调坐标轴能不能调出来，如果超范围 ...

谢谢老师的回复~
  这是我们学校公共平台的仪器，型号是BD FACSCalibur TM， 我用flowjo把横纵坐标调到了10的6次方，但是10的4次方之后的信号还是不显示，像是被横竖切了一刀。我想问问老师，细胞荧光信号可检测的值（就是横纵坐标的大小）是机器默认的吗？还是可以通过手动去设置？

小江

毛豆24821 发表于 2018-12-24 14:40
超出坐标上限的信号还在，只是统一收集成了最大值，所以比例仍正确的。
是所有的流式仪都是这样的嘛？我 ...

老师您也遇到了这种问题吗？您最后是怎么处理的？那些超出上限的信号可以调出来吗？