关于血小板活化标志物的问题

bravegao · 发表于 2010-11-9 17:30:12

想做PAC-1与CD-62P方面的实验，以前也给别人做过，但效果不太好，机采的血小板还没怎么处理，这两个指标就不同程度激活了，导致实验结果不好。想搞清楚是否拿抗凝血做效果能好些吗？那离心转数、离心时间、抗凝剂之类的对血小板激活是否也有些影响呢？我还应注意哪些问题才能把非特异激活因素的影响降到最低呢？

请指教！！！！！

zark_00 · 发表于 2010-11-9 17:30:13

本帖最后由 zark_00 于 2011-7-26 15:24 编辑

用全血做，抗凝用PPACK自己配成工作液，用好一点的空白采血管
试过用制备的PRP做，效果很不好，每个样品同时同一条件离心，富集程度不一样。而且离心（尤其是起步的时候）也是机械激活。还有采血管材质如果不行，表面附着也能激活。
不知道你们用什么激活剂 ADP?
我用过CRP ,ADP 和TRAP-6 amide

niwanmao · 发表于 2010-11-9 21:08:53

没错，血小板活化很难做，所以我们觉得没有条件开展，于是现在一直没开展。

请见Current protocol in cytometry中的相关章节：
To minimize ex vivo platelet activation, blood samples should be processed within ∼30 min after drawing blood for many assays.
The act of drawing blood is itself a potential source of artifactual platelet activation; therefore, the following recommendations are suggested (Michelson et al., 2001):
1、Use a light tourniquet or none at all
2、Use a 21-G (or larger bore) needle
3、Ensure a smooth draw (i.e., good flow)
4、Discard the first 2 ml of blood drawn

更详细的资料可以见这篇帖子中FLASH文档的第2-4页：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=59&highlight=%E8%A1%80%E5%B0%8F%E6%9D%BF

bravegao · 发表于 2010-11-10 09:02:23

谢谢，我改道吧，做别的。

一成天 · 发表于 2011-3-25 14:17:49

晕啊，本来也想做这个的，现在看来确实不好把握

zhang4083 · 发表于 2011-3-25 21:07:16

我一直做，血小板不好找。

aninawang · 发表于 2011-3-27 17:54:56

做血小板活化之类的实验，要用CTAD抗凝管。

wangyekai · 发表于 2011-4-27 15:01:45

标本要半小时送到，送检途中不能剧烈震动（看送血阿姨的良心了），送到了立即多聚甲醛固定。
能不开展的就不要开展，太烦！

niwanmao · 发表于 2011-4-27 18:22:01

wangyekai 发表于 2011-4-27 15:01

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标本要半小时送到，送检途中不能剧烈震动（看送血阿姨的良心了），送到了立即多聚甲醛固定。
能不开展的就 ...

呵呵，是的，这类项目的开展需要一大堆条件配套。

vtea · 发表于 2012-4-8 22:57:25

影响因素真是太多了！血小板真是挺麻烦的~~带我论文的老师就在做这个，结果很不尽如人意，不知她会怎么解决~~

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