流式检测PBMC中NK细胞某蛋白的表达，抗体选择.....

天天向上

流式检测PBMC中NK细胞某蛋白的表达
想请教一下
（1）流式细胞仪是BD FACSCanto Ⅱ，只检测CD3、CD56可以吗？用FITC-CD3、PE-CD56、APC-目的蛋白，这个组合可以吗？
（2）抗凝剂是用肝素钠、肝素锂还是EDTA？
临床上采血用肝素锂和EDTA比较多，可是看到一些帖子说，不推荐用肝素锂；而且之前养CIK细胞的时候用的是EDTA，到后期没长。
（3）采血量要多少ml，采完血要是不能及时分离，怎么保存
才开始做免疫相关的，请不吝赐教 谢谢

sunny2829

1，FITC,PE,APC，组合可以的。如果目的蛋白表达较低的话，可考虑PE-目的蛋白，APC-CD56.
2，这个我到没有比较过。我之前用的是肝素钠，后续细胞培养还可以。你这个要后续细胞培养吗？
3，正常人外周血20ml大约能提取9.6-13.6*106PMBC。其中NK占PBMC15%左右。我之前拿外周血裂解红细胞直接检测，取1ml也可以检测TBNK的。你的实验需要根据你目的蛋白的表达情况分析，建议进行预实验。
采完血不能及时分离，那什么时候可以分离啊？需要保存多久啊？主要用于做哪些实验啊？长期保存还是要分离PBMC，液氮冻存的。

天天向上

sunny2829 发表于 2019-1-18 11:37
1，FITC,PE,APC，组合可以的。如果目的蛋白表达较低的话，可考虑PE-目的蛋白，APC-CD56.
2，这个我到没有比 ...

谢谢回答。
要是用PE标记目的蛋白的抗体的话，FITC会不会对它有干扰？

sunny2829

天天向上 发表于 2019-1-19 08:06
谢谢回答。
要是用PE标记目的蛋白的抗体的话，FITC会不会对它有干扰？

有荧光溢漏，做好补偿即可

天天向上

sunny2829 发表于 2019-1-21 08:45
有荧光溢漏，做好补偿即可

调补偿的话，那每个病人都要设置阴性对照和单染对照吗？怕细胞不够啊

mybiosciences

不培养的话抗凝剂没有太大问题，全血培养用肝素钠
APC标记的蛋白还是抗体？
可分离PBMC液氮保存，但死细胞会增多，建议加死活染料