关于细胞因子检测中排除死细胞的问题

whimsyhui

最近在做小鼠心和脾的炎症细胞分型，在排除死细胞的时候出了点问题，同样的处理方法，脾脏活细胞在90%左右，心脏只有5%左右，有点想不明白为什么。心脏和脾脏一样都是分离出来就马上处理了，感觉心脏细胞不应该死这么多啊？出现这种情况是分析方法出了问题还是操作问题呢？
（图片分别是脾脏和心脏细胞fvs510通道的样各三个）

niwanmao

看着确实像死细胞。
只染了死活染料？其它都没染？

whimsyhui

niwanmao 发表于 2019-3-20 11:58
看着确实像死细胞。
只染了死活染料？其它都没染？

我总结了一下这次染色的问题，完全想不明白，在这里请教一下倪老师。
1.淋巴分群时候染色出现cd3很大一部分在0坐标以左，这个用的是cd3-pecy7为什么会出现这种情况呢？

2.T B淋巴细胞分群出现了TB双阳性，而且是很大一群，是不是跟上面的那个cd3异常有关系呢？


3.同一抗体的单标管心脏与脾脏血液差异大，下面两张图分别是：图1:  cd8单标 左脾 右心  图2: cd45单标 左心 右血，为什么出现这种情况呢？是因为心脏活细胞太少吗？但是有面那张图用fvs510分死活细胞的时候，心脏活细胞有60%多，所以很是想不明白。

   

刚做流式不久，又染的比较多，所以问题有点多。请老师赐教

niwanmao

whimsyhui 发表于 2019-3-21 23:01
我总结了一下这次染色的问题，完全想不明白，在这里请教一下倪老师。
1.淋巴分群时候染色出现cd3很大一部 ...

如果你用的方案是多色的，还是需要把你的方案完整的展示出来，才能找到问题所在，不排除荧光渗漏，也不排除细胞非特异性染色。
目前看来非特异性染色可能性比较大，可能跟你选择的CD3抗体结合能力并非特异的缘故。
最后一个问题的CD8心脏内细胞没分群，这是否意味着你提取的心脏细胞没有T细胞浸润？

whimsyhui

niwanmao 发表于 2019-3-22 08:27
如果你用的方案是多色的，还是需要把你的方案完整的展示出来，才能找到问题所在，不排除荧光渗漏，也不排 ...

是这样分的组
我是造的模型鼠，应该是有T细胞浸润的，但是没有分群，觉得很奇怪。刚刚图一cd3那个是第4组的样品管。
cd3-pecy7出现那种情况，和apccy7有关系吗？