做流式的大体思路是什么

pengwenpan

今天的问题有点多,就是请教一下 做流式的大致的思路是什么,有没有必要 每次流式 或者没中目的的流式实验都需要 fsc和ssc这个图,还是大致的思路,是首先调出ssc和fsc的图。然后圈门画出自己需要的细胞团块,在进行研究

鬼鬼未影

每次建立方案，都需要空白管上样，调节FSC/SSC电压找到细胞，调节FL1/FL2的电压使所有细胞都位于左下象限，圈出自己所需要的细胞群，设门，确定FL1/FL2十字门位置，再上单染管调节各通道的补偿。

niwanmao

看你的实验目的，一般FSC和SSC散点图是最常用的。但在我们临床免疫分型上，我们第一个图是FSC-A/FSC-H排粘连、然后用CD45/FSC排除碎片。因此，需要根据具体的应用决定自己的设门策略，没有统一的模式。

mybiosciences

根据课题目的设计技术路线（技术路线中有流式实验），根据实验目的选择marker和实验方案，根据marker和仪器配置选择颜色和染色方法，根据实验目的画获取和分析模板

stf1990

niwanmao 发表于 2019-3-22 08:33
看你的实验目的，一般FSC和SSC散点图是最常用的。但在我们临床免疫分型上，我们第一个图是FSC-A/FSC-H排粘 ...

倪老师，如果不设CD45/fsc，对数据准确性影响大吗？比如研究目的是T 细胞的话

niwanmao

stf1990 发表于 2019-3-26 00:08
倪老师，如果不设CD45/fsc，对数据准确性影响大吗？比如研究目的是T 细胞的话 ...

如果你只是分析T细胞里面各个亚群，那么以CD3＋T为分母，问题不大。
如果你需要分析CD3＋T占白细胞的比例，那么碎片就必须排除掉。用CD45/FSC排除的比较干净些。FSC/SSC如果分得比较好也可以。

stf1990

niwanmao 发表于 2019-3-26 08:56
如果你只是分析T细胞里面各个亚群，那么以CD3＋T为分母，问题不大。
如果你需要分析CD3＋T占白细胞的比例 ...

感谢解答！！