抗原表达的描述让人晕，什么叫dim，什么叫heterogenous？

niwanmao

平时，无论是做临床的表型分析，还是一些科研实验，大家都会需要描述抗原表达情况，阴性、阳性，而阳性又分为弱阳性（dim、partial positive）、强阳性。那么究竟如何才能正确地去描述呢？
2018年1月份的《AIEOP-BFM consensus guidelines 2016 for flow cytometric immunophenotyping of Pediatric acute lymphoblastic leukemia.》一文，给我们带来了比较标准的解读方法，总结如下。

阴性（Negative）阴性的定义是几乎所有的细胞与阴性对照重叠（尤其是峰的位置，与阴性峰位置无明显向右偏移），或阳性比例<10％，如下图：


弱阳性（Weak Positive）弱阳性的定义是大部分细胞与阴性对照重叠，或阳性细胞比例10％～50％。
第一种图形如下，细胞峰（红色）整体右移，峰的位置与阴性对照拉开一定差距：


第二种图形如下，有阳性群延伸，但没有形成峰，与阴性群没有明显分隔，且阳性比例10％～50％：


弱阳性的第二种图形还有以下三种情况，叫部分阳性1（Partial Positive 1，为什么编了1，因为后面还有2），有明显的分隔，但是阳性率10～50％：



强阳性（Strong Positive）强阳性的定义就是只有少量细胞与阴性对照重叠，或阳性比例≥50％。
强阳性分成以下几种情形，第一种是定义里说的，只有少量细胞与阴性对照重叠：


第二种是所有细胞与阴性峰形成明显分隔，常见的是我们做T淋巴细胞时的CD3：


第三种就是下面的部分阳性2（Partial Positive2），与前面部分阳性1的区别就在于比例，部分阳性2的比例是>50％，因此归属到强阳性这一大类：


第四种就是我们标题中所说的Heterogenous，中文里面有叫异质性表达或不均一表达，指的是细胞表达强度跨越1.5个Log，可以小部分与阴性区域重叠，我们做免疫分型时这种表达模式比较常见的是骨髓里面中性粒细胞的CD16和CD11b，从中晚幼到杆分阶段呈这种连续性表达：



最后看一个CD45表达情况判断的示意图，找到正常参照背景，再利用上述峰形偏移去判断：



这样的图文定义看下来，你们是否对抗原表达的描述有了清晰的概念了呢？

btx362237729

终于有个标准了

www

倪老师，我想问个问题，我们做出来的阳性结果的阴性峰比阴性对照的峰向右偏移了一部分，是因为什么呢？可以参考如下，是非特异性结合还是偏移的这一部分属于低表达的呢？

niwanmao

www 发表于 2019-4-9 13:58
倪老师，我想问个问题，我们做出来的阳性结果的阴性峰比阴性对照的峰向右偏移了一部分，是因为什么呢？可以 ...

1、是单标吗？
2、这个阳性对照是否可靠？

www

niwanmao 发表于 2019-4-9 17:30
1、是单标吗？
2、这个阳性对照是否可靠？

这个是双标，是PE和BV421，这两个荧光应该没有交叉，主要想得到PE阳性的结果。图中有阳性的这个样品是我们需要检测的样品，不是对照。多次实验都发现阳性的阴性峰比阴性对照偏移一点，而且阳性的结果越大，阴性峰偏移的更大，抗体都是同一浓度配制的。不知道怎么解释这个问题。

niwanmao

www 发表于 2019-4-10 13:50
这个是双标，是PE和BV421，这两个荧光应该没有交叉，主要想得到PE阳性的结果。图中有阳性的这个样品是我们 ...

由于不知道你具体的指标和检测的标本类型，所以无法做出准确判断，只能做一些猜测：
如果是在确定细胞密度、抗体用量、染色体积都一致的前提下，出现你这张图里面的结果，那么这些“阴性峰”可以考虑弱表达，因为从图上看，只是阳性比例增高，并不是荧光强度增高，所以阴性峰的右移，可以认为是另一群细胞的表达量在增高，但未达到与阴性峰足够分离

毛豆24821

niwanmao 发表于 2019-4-11 08:52
由于不知道你具体的指标和检测的标本类型，所以无法做出准确判断，只能做一些猜测：
如果是在确定细胞密 ...

所以这个marker的阴性峰应该统一在10^3右边一格位置，而不是10^2右边一格位置？

如果每个样本的阴阳峰的位置都不一样该怎么画门？每个样本做一管自己的阴性管？

毛豆24821

                               
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请教下，阳性表达很低的样本这样也不算阳性吗？

另外，最近发现一些问题，同样都是FMO的样本，里面有不同的细胞群的阴性峰位置差很多。之前发现G-MDSC和其他的细胞（例如M-MDSC,B,T等）的CCR2的阴性位置就是不一样，这种情况合理吗？是否需要将G-MDSC的FMO-CCR2单独画门？

niwanmao

毛豆24821 发表于 2019-12-19 14:53
所以这个marker的阴性峰应该统一在10^3右边一格位置，而不是10^2右边一格位置？

如果每个样本的阴阳峰的 ...

阴性位置，不是要求你必须在哪个位置，而是你采用正确合适的电压之后，样本内阴性细胞所在的位置，以此为参照，进行如顶楼的判断。

zhji1231150260

请问强阳性的第一种情况，阳性比例画门是按图中虚线处画门吗