关于流式分析大鼠Th17的画门策略问题-求指导

fsbrb

  各位老师、同学们好，我是一名研究生，最近在运用流式分析SD大鼠肝、外周血、脾、淋巴结中Th17的频率的过程中遇到了关于画门策略的问题，希望大家能慷慨指导，各抒己见。
  我将大鼠牺牲后，取肝、外周血、脾、淋巴结用流式分析Th17的频率，且事先用单阳管在流式机上调好了补偿。Th17的染色方案是CD3+CD8-IL-17A+（在PMA cocktail刺激5h后固定破膜的条件下上的流式）
  但是在对Th17进行画门时，出现了一群似有似无的细胞群，像一把钝刀一样紧靠着阴性群，而在阴性群及这把“钝刀”上方又有一群IL-17A荧光强度更强的细胞。如下图，是淋巴结中Th17的画门策略。
  想请问各位老师和同学们，我的这个Th17的画门策略该画在哪儿呢？应不应该把这把“钝刀”画进去呢？

niwanmao

这个门设的可以的。

stf1990

可以尝试把Live/Dead 染色还有single cell gating加进去，看看有没有变化。

fsbrb

niwanmao 发表于 2019-4-9 17:30
这个门设的可以的。

谢谢倪老师的回复。请问倪老师，那么红圈中的那群似有似无的细胞考虑是什么呢？

fsbrb

niwanmao 发表于 2019-4-9 17:30
这个门设的可以的。

谢谢倪老师的回复。请问倪老师，那么红圈中的那群似有似无的细胞考虑是什么呢？

niwanmao

fsbrb 发表于 2019-4-9 22:08
谢谢倪老师的回复。请问倪老师，那么红圈中的那群似有似无的细胞考虑是什么呢？ ...

是这样的，有时候阴性细胞不像我们想象中的那么单纯集中，少量的 扩散是允许的。